鲫鱼蛋白激酶PKR-like的Zα结构域与聚肌胞苷酸的结合.pdfVIP

维普资讯 动 物 学 研 究 2,005。Jtm．26 (3)：237—242 CN53—-lO40／Q ISSN0254—-5853 ZoologietaResearch 鲫鱼蛋白激酶PKR．1ike的Zcz结构域与聚肌胞苷酸的结合 胡成钰 ，23，谢宗波3，张义兵 ，陈玉栋 ，邓政东 ，蒋 瑶 ，桂建芳 ， (1．中国科学院水生生物研究所，淡水生态与生物技术国家重点实验室，湖北 武汉 430072； 2．中国科学院研究生院，北京 100039；3．南昌大学 生命科学学院，南昌 330047) 摘要：根据鲫鱼类PKR蛋白激酶基因 (CaPKR．1ike)的全长cDNA序列，克隆CaPKR-likeZa结构域 cDNA ( l、Za2和ZalZa2)，原核表达成功获得3种融合蛋 白P 1、 和P 12。凝胶阻滞实验结果显示：P 1、 Pz,a、P 1和P2混合表达蛋白不能与聚肌胞苷酸 (PolyI：C)结合，而表达完整的 结构域的P 1与PolyI：C 有明显的结合现象。另外，3种表达多肽P1、P2和P12在体外分别都能聚合形成二聚体。与P 相·比，P2 和P 】za2二聚化现象显著。结果暗示病毒复制时产生的副产物dsRNA能与CaPKR．1ike蛋白的相关结构域结合从 而调节其生理功能。 关键词：鲫鱼类PKR蛋白激酶；Za结构域；原核表达；PolyI：C结合；二聚化 中图分类号：Q959．468；$941 文献标识码：A 文章编号：0254—5853(2005)03—0237—06 BindingoftheZ．)【Domainfrom a CarassiusauratusPr0tein KinasePKR．1iketoPolyinosinic：PolycytidylicAcid HUCheng—yu，，，XIEZong—bo ，ZHANGYi—bing ，CHENYu—dong ， DENG Zheng—dong，JIANG Jun，GUIJian—fang， n．StateKeyLaboratoryofFreshwaterEcologyandBiotechnology， 疵¨ofHydrobiology，theChineseAcademyofSciences， Wuhan 430072，China；2．GraduateSchooloftheChineseAcademyofSceinces，Beijing 100039，China； 3．Collegeof工fieSceince。NanchangUniversity，Nanchang 330047，hCina) Abstract：Threefusionpeptides， 1， 2and 12forZuldomain，Zu2domain，andZalZa2domainsofCaras- siusauratusPKR-likegene，respectively，weresuccessfullyexpressedbyaprokaryoticexpressionsystem andthenpurified byaffinitychromatography．GelmobilityshiftassayrevealedthatP lZa2ratherthanPzal，P 2，andmixtureofP 1and 2，Wascapabletobindtopolyinosinic：polycytidylicacid(PolyI：C)invitro．Inaddition，allofthethreefusionpep- tidesallCOuldofrmdimer。withstrongdimerizationofr 2and lZa2butarelativeweakonef0r 1．Th eresuhssuggest thatdsRNA．theby．bbalybindstotIleZadomainofCaPKR- likeandthenregulatesitsphysiolo