间皮素对卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长影响及基因治疗的研究.pdf

中文摘要 间皮素对多日巢癌裸鼠腹腔移植瘤生长的 影响及基因治疗研究 摘 要 interference 目的；利用慢病毒介导的RNA干扰(RNA 间皮素(MesothelinMSLN)基因的表达，创建了稳转细胞株 的稳转细胞株建立荷人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型，观察 MSLN对裸鼠成瘤率、移植瘤的数目及重量的影响。应用问 皮素RNAi慢病毒液进行治疗，并观察其疗效。同时进行检 测慢病毒液的毒性试验。 方法： l裸鼠动物模型的建立 级．)环境中， 常规收取 SKOV3、 级(SPF 定表达的细胞株)细胞(由本课题组自建，并已经过鉴定)，制 个．)注射在裸鼠腹腔内。 2实验分组 2．1荷人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型的建立(实验一)：裸 中文摘要 四种卵巢癌细胞分别注射到裸鼠腹腔内，14天后观察成瘤隋 况。 2．2单次慢病毒注射荷人卵巢癌裸鼠腹腔成瘤生长状况 的观察(实验二)：裸鼠随机分成4组，慢病毒液 毒液同时单次注射到裸鼠腹腔内，14天后观察成瘤情况。 2．3多次慢病毒滓射荷人卵巢癌裸鼠腹腔成瘤生长状况 卵巢癌细胞SKOV3分别和PBS及两种慢病毒液同时裸鼠腹 腔内注射，后续隔日注射慢病毒液及PBS，14天后观察成瘤 情况。 2．4慢病毒毒性实验(实验IN)：裸鼠随机分成3组，慢病 组，每组5只，裸鼠腹腔内分别注射慢病毒液及PBS，3周 后处死裸鼠取腹腔各脏器进行病理组织学检查，观察慢病毒 对裸鼠腹腔各脏器的毒副作用。 3移植瘤生长情况的观察 每天观察裸鼠生长情况，用电子天平称重并测量腹围， 腹围增加明显者认为腹腔转移瘤或腹水形成，以后每隔2天 测量裸鼠体重和腹围。接种14天后处死裸鼠，解剖腹腔， 中文摘要 观察腹腔有无转移灶，若有转移灶，记录转移灶个数、部位， 测量最大瘤体直径，剥离肿瘤进行称重。 4Western Blotting检测多次慢病毒注射治疗荷人卵巢癌 裸鼠腹腔移植瘤组织中MSLN蛋白的表达。 5免疫组织化学法检测多次慢病毒注射治疗荷人卵巢 癌裸鼠腹腔移植瘤组织中MSLN的表达。 6肉眼及病理学HE染色检查慢病毒毒性试验中裸鼠各 脏器有无改变。 结果： 1移植瘤生长状况的监测： 1．1荷人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型的建立：亲本细胞 裸鼠明显增加，差异具有统计学意义似O．05)。处死裸N,_『fi 成瘤率为60％(3／5)，肿瘤个数较少，分布范围较局限，主要 集中在注射部位、大网膜和肠系膜，其他部位较少见。 1．2单次慢病毒注射荷人卵巢癌裸鼠腹腔成瘤生长状况 较，在接种第14天体重和腹围无明显差别俨o．05)，慢病毒 肿瘤的重量、个数、分布与其他两组相比较，没有统计学差 别∽0．05)。 1．3多次慢病毒注射荷人卵巢癌裸鼠腹腔成瘤生长状况 中文摘要 治疗组的移植瘤成瘤率为40％(4／10)，肿瘤的重量、个数及 分布与其他两组相比较差异具有显著性(尸O．05)。 2Western Blotting结果显示，多次慢病毒注射治疗荷人 较对MLSN基因的干扰效率分别为75．6％和8．9％， (肚O．05)。 3免疫组织化学法检测多次慢病毒注射治疗荷人卵巢 癌裸鼠腹腔移植瘤实验中各组问肿瘤组织MSLN的表达情 况：MSLN表达在肿瘤细胞的胞膜上，慢病毒液 组间无明显的统计学意义(尸O．05)。 4毒性试验结果：腹腔内分别注射相同剂量慢病毒液 异无统计学意义p0．05)，裸鼠一般状况良好，饮食及活动 正常，未发现明显的全身毒副作用。21天后处死裸鼠，各器 官均未发现明显的肉眼病理改变，取心、肝、脾、肾做病理 学HE染色观察，均未见明显病理改变。 4