年龄相关性冠心病病人骨髓间充质干细胞体外培养及低能量激光干预对细胞增殖能力影响的研究.pdfVIP

中文摘要 年龄相关性冠心病病人骨髓间充质干细胞体外培 养及低能量激光干预对细胞增殖能力影响的研究 摘 要 stem cells， 目的：骨髓间充质干细胞(mesenchymal MSCs)具有易于在体外扩增、多种分化潜能、低免疫 性等特性，l临床应用前景广泛，但其需在体外应用含胎 牛血清等培养基进行培养，可能导致细胞生物学特性 发生改变以及其它潜在风险，从而限制了临床批文的 下发，故临床试验细胞来源多限于骨髓单个核细胞 bonemarrow (mononuclear cells，BMC)，循环血前体 blood--derived 细胞(circulating progenitorcells，CPC) 及骨骼肌原细胞(skeletalmyoblasts)，有关冠心病病人 骨髓MSCs基础研究鲜见报道。本研究旨在探索适于冠 心病病人骨髓MSCs骨髓提取、细胞分离、培养的方法， 并比较中老年冠心病病人骨髓MSCs增殖能力差异；探 索冠心病病人骨髓MSCs冻存复苏可能性及对细胞生 长特性的影响；应用低能量激光对细胞培养过程进行 干预，了解其对细胞增殖能力的影响。 方法：冠心病，三支血管病变，行CABG手术病 离心法分离骨髓单个核细胞，进行贴壁培养，适时传 代，记录原传时间、首次传代时间、平均传代时间； 中文摘要 1 P 取中年组、老年组各1O例冠心病病人骨髓MSCs 4天 代细胞接种于96孔板，于接种后第2、4、……1 用MTT法490nm波长处测定吸光度，绘制细胞增殖 曲线；取生长旺盛之骨髓MSCs进行冻存，中老年组 各3例，3-4个月后进行复苏，观察细胞生长与传代 情况；老年组6例骨髓MSCsP2代细胞，接种于96 孔板，接种24小时细胞完全贴壁后应用低能量激光 Laser (0．5，2．0J／cm2)对细胞进行照射(Low．Level O天用 MTT法测定细胞增殖曲线。 结果：3例老年冠心病病人无明显骨髓液抽出，劈 开胸骨后发现骨质疏松明显，骨髓腔呈空洞样改变；23 例中年冠心病病人及23例老年冠心病病人骨髓液经 O Ficoll液分离离心能获得17数量级单个核细胞。贴壁培 养后骨髓MSCs呈梭型生长，并能进行传代，最多传代 超过15代，培养时间超过92天。随着年龄增加，老年组 原传时间、传P1时间、P1．P6平均传代时间均延长 (P0．05)。培养过程中，未能达到原传，以及传代过 程中失去传代能力情况随着年龄增加以及传代次数增 加而增加，虽P0．05，但老年组更为明显；增殖曲线显 示，从第4、6天开始细胞增殖加速，与中年组的骨髓 MSCs增殖曲线相比，老年组的骨髓MSCs增殖较中年组 2、1 减慢，第1 4天P0．05，有统计学意义(n=l0)。冻 存细胞复苏后仍能进行生长传代，细胞形态及传代能力 与冻存前无明显变化。接受低能量激光照射后，骨髓 MSCs增殖曲线显示，第4、6、8、1 中文摘要 两照射组之问无显著性差异，PO．05。 结论：本研究证实了从冠心病人的胸骨分离培养 骨髓MSC