2011生物化学实验-9个.pptVIP

植物组织中还原糖和总糖的测定 醋酸纤维素薄膜电泳 Vc的测定 琥珀酸脱氢酶的作用和竞争性抑制作用 牛奶中酪蛋白的提取与鉴定 血液中葡萄糖的测定 植物组织中DNA的提取 双缩脲测定蛋白质的含量 酶的性质 一、分组说明 每班分2大组，每个大组（再分2或3小组）中2人一个实验,大组采用循环实验的方法,同时开出不同的9个实验. 生物化学所用的实验技术 1.样品: 动物样品: 血清、牛奶、组织 植物样品：果实、叶、茎等 为了提取物质，需匀浆，研磨开始时加入少量研磨缓冲液，边磨边加。 2．移液管的使用： 注意： 3．离心机的使用： 平衡（管平衡、机器平衡）缓起和慢停 4．分光光度计 机器原理和测定原理（比尔定律） 5．水浴锅的使用 实验一、温度、pH及酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 检测水解：可以用遇碘呈不同颜色来观察。 淀粉遇碘呈蓝色;糊精按分子从大到小的顺序，遇碘可呈蓝色、紫色、暗褐色和红色;最小的糊精和麦芽糖遇碘不呈现颜色反应。 三、实验步骤 1、淀粉酶液的制备 水漱口制备。 2、温度对酶活性的影响 3、pH对酶活性的影响 4、酶的激活剂、抑制剂对酶活性的影响 5、酶的高效性 本实验注意事项： 加入所有的试剂和酶液后一定要摇匀，最好用吸管轻轻吹打几次。 稀释唾液加入时应迅速，其中放入沸水浴的一管，当唾液加入后应立即放入沸水浴。 实验二 牛奶中蛋白质的提取与鉴定 一、实验目的 学习从牛奶中制备酪蛋白的方法并进行鉴定试验 二、实验原理 蛋白质等电点 沉淀 2、酪蛋白的性质鉴定 1）.溶解度观察 2）米伦反应： 少许酪蛋白+lml H2O+米伦试剂10滴， 振摇，加热 观察其颜色变化 注意事项 牛奶和醋酸缓冲液体积一定要相等 注意离心时要对角配平 实验三 血液葡萄糖的测定 一、实验目的 学习和掌握Folin-吴宪法测定血糖的方法 二、实验原理 2、计算 注意事项 一定要等水沸后，再放人血糖管。血糖管可用橡皮筋扎成束，直立水中使受热一致。加热要准确8分钟，时间过久，呈色较深;时间不足。颜色过浅。均影响结果的准确性。冷却时，切不可摇动血糖管，以防还原的氧化亚铜被空气中氧所氧化，降低实际结果。 用1：4磷钼酸溶液加至25刻度处后，用橡皮塞塞紧管口颠倒摇匀，用空白管调零，在420nm波长处进行比色， 实验四、血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳 一、实验目的 学习醋酸纤维薄膜电泳的操作技术，了解电泳技术的基本原理。 二、实验原理 电泳：带电粒子在电场中泳动的现象。 电泳迁移率:单位电场下的电泳速度。 血清蛋白:清蛋白、 α－球蛋白、β－球蛋白、γ－球蛋白和各种脂蛋白等 三、实验步骤 实验五 双缩脲测定蛋白质含量 一、实验目的 掌握双缩脲测定蛋白质的方法和原理 二、实验原理 双缩脲在碱性溶液中与Cu2+产生紫色的络合物,这一反应称“双缩脲反应”。 蛋白质分子中肽键，也能与Cu2+ 发生双缩脲反应， 溶液紫色的深浅与蛋白质含量在一定范围内成正比，而与蛋白质的氨基酸组成及分子量无关。 该紫色的络合物在540nm处有最大吸收值， 通过测定540nm处的吸光值用于蛋白质含量的测定。 三、实验步骤 1、标准曲线制作（已制好） 2、样品测定 3、结果计算 实验六 维生素C的定量测定（2，6-二氯酚靛酚滴定法） 一、实验目的 掌握滴定法测定Vc含量的原理和操作。 二、实验原理 还原型Vc能还原染料2,6-二氯酚靛酚钠盐， 2,6-二氯酚靛酚在酸性溶液中，呈红色，被还原后变为无色。 所以，滴定液呈淡红色30秒不退色，即为终点。 用标准Vc滴定与样品做比对。 三、实验步骤 1.提取: 2.0克松针+少量 2%草酸 匀浆 3500rpm，10min离心后 用2%草酸定容到50毫升 2、滴定 3、计算 计算1000克样品所含维生素C的毫克数。 （V1－V2）×K×V X = ×1000 W×V3 式中： X ：1000克样品所含维生素C毫克数 W ：称取样品重量毫克数 V1：滴定样品所用染料毫升数 V2：滴定空白所用染料毫升数 V3：样品测定时所用滤液毫升数（即10毫升） V ：样品提取液稀释至总体积（即50毫升） K ：1毫升染料所能氧化维生素C之毫克数，可由标定算出。 注意事项 选择样品尽量选择绿色的新鲜的松针 滴定过程宜迅速，一般不超