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色谱技术简介 Brief introduction;色谱技术简介 Brief introduction 平板色谱;吸附剂或载体的选择及薄层的制备;1）纸色谱;2)薄层色谱;2.薄层色谱操作技术;活度级别;不同温度下硅胶表面硅醇基吸附水分子层的损失情况;(3)粘合剂与添加剂;(4)薄层的制备方法 ①手工制板 a.软板 b.硬板(含粘合剂) ;(5)薄层板的活化 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质R?值就小。 ① 活化：105~120℃干燥 0.5~1h Ⅱ~ Ⅲ 级 ②活度的标定： a.氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取偶氮苯30mg和对-甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各20mg溶于四氯化碳50ml中，摇匀备用。 标定方法：取上述溶液20μl点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的R? ，由下表中确定???板的花度级别。 ;染料;b.薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹Ⅲ ）各20mg溶于1ml氯仿中，摇匀备用。 标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙酸乙酯（9：1）展开，三种染料能分开，对-二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这样的硅胶活度与前述Ⅱ级氧化铝的活度相当。;（6）薄层板的预处理 常用方法：用氯仿-甲醇(1:1)或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在110℃干燥0.5~1h，干燥器中保存备用。 除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理。;2）点样： （1）样品溶液的制备 ①纯品的溶解 ②样品的提取与净化 a.溶剂提取法 b.液液萃取法 c.液固萃取法-----亲脂型和亲水型固体萃取剂;(2)点样 ①样品浓度 0.01~1.00% ②点样体积 经典薄层 1~5 μl 高效薄层 0.1~0.5 μl 点样过多会造成原点“超载”，展开剂产生“绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。 ③点样直径 经典薄层 5mm (一般3mm) 高效薄层 1~2mm ④点样间距 经典薄层 1~2cm 高效薄层 0.5cm;⑤点样方法 a.点状点样 b.带状点样 c.自动点样 d.接触点样;3）展开： （1）展开方式 ①线性展开 a.上行展开 b.下行展开 c.双向展开 d.近水平展开 ②环型展开 展距短、展速快、节约展开剂、分离效率高，适用于R?较小的组分的分离。 (R?c)2 = R?;③反圆心式展开 展速快、可提高R?值较大组分的检测灵敏度和定量准确性。 ④多次展开 a.单向多次展开 nR? = 1 - (1 - R?)n 一般二次展开即可,能得到最佳的分离,但还不能使斑点十分浓集。 b.增量多次展开 增量多次展开能提供比一般薄层色谱好得多的分离度，在短时间内得到较多次展开，有利于斑点的浓集及R?值较小的组分的分离。;c.阶式展开（分级展开） 使用两种或两种以上极性不同的展开剂分别展开几次，可以将极性相差很大的组分在一块薄层板上分离。 用乙醚-环己烷-甲醇（5：3：0.5）、乙醚-环己烷-甲醇（5：3：0.5）、 甲苯-氯仿甲醇-二乙胺（7：2：1：0.3）展开三次，在一块薄层板上实现了11种异喹啉生物碱的分离。 ; 在常规色谱中，仅在展开时出现一次斑点浓集。如重复展开n次，则最后斑点宽度降低到:(1 - R?)n× 起始宽度，但实际上没???(1 - R?)n 那么明显，主要是展开时又扩散增宽，所以多次展开的优点不是在斑点的宽度上，而是增加相邻斑点的距离，并经过一个最大值后再随着继续展开而降低。 ;色谱技术简介 Brief introduction 薄层色谱;色谱技术简介 Brief introduction 薄层色谱;色谱技术简介 Brief introduction 薄层色谱;色谱技术简介 Brief introduction 薄层色谱;色谱技术简