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体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则——生物芯片类试剂生产及质量控制技术指导原则（报批稿） 2009-05-15 09:00 ??? 本指导原则所定义的生物芯片诊断试剂是指将多个生物探针（包括DNA片段，寡核苷酸、抗原、抗体，组织，细胞等）按预先设计的排列方式固定在特制的基质（包括玻璃片，尼龙膜，硝酸纤维素膜等）上，用特定的方法提取生物靶分子并进行标记，然后与固定在基质上的生物探针特异性的结合，再用相应的检测设备（如激光扫描仪、CCD检测仪等）和分析方法（包括软件）进行检测、记录、分析，实现对生物靶分子的定性或定量检测的试剂。??? 根据芯片制作的主要原料和方法，生物芯片可分为核酸芯片、蛋白芯片、细胞芯片、组织芯片等。本指导原则是针对核酸和蛋白为检测靶分子生物芯片的生产及质量控制技术指导原则，其它类型靶分子检测的芯片诊断试剂可参考本指导原则。国家食品药品监督管理部门将依据科学技术发展的需要，适时组织修订。??? 一、基本原则??? （一）试剂研制、生产用各种原料、辅料等应制定相应的质量标准，并符合有关法规的要求。??? （二）试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。??? （三）生物芯片类试剂在研制时，应当按照科学、规范的原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。??? （四）试剂研制、生产过程中所用的物料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。??? （五）生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。??? 二、原材料质量控制??? （一）核酸检测芯片??? 核酸芯片检测时，从生物样本中提取的核酸可用荧光标记、金标记和酶标记；检测方法包括光谱学方法和化学显色。下面为荧光标记芯片技术指导原则，采用金标记和酶联显色等的生物芯片诊断试剂可参照核酸芯片和蛋白芯片相关部分。??? 1、主要生物原料??? 核酸检测芯片的主要生物原料包括模板DNA、dNTPs、引物、探针、标记物等。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定，企业应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，同时，供应商应提供相应的质量保证证明和相应的质检报告，达到生产规定的质量标准。如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。??? （1）模板DNA??? 重组DNA：经测序验证，关键碱基或序列没有错误。1×TE溶解，浓度为100ng/μl以上，-20保存。作为阳性参考品时，其稀释度由企业根据产品标准确定。??? （2）dNTPs（dATP/dUTP/dGTP/dCTP/dTTP）??? HPLC纯，PCR级，无DNase、RNase污染，-20以下保存。??? （3）引物??? 生产中的引物原材料为冻干粉，PAGE纯或HPLC纯。用标准DNA模板扩增，电泳检测，谱带单一，大小正确，与对照引物比较，产物量一致。符合视为合格引物，-20以下保存。??? （4）探针（用于阵列制备）??? 重组DNA, 冻干粉（或1×TE溶解液）：至少满足一个批次的用量，酶切鉴定分析图谱。??? PCR产物，冻干粉（或1×TE溶解液）：至少满足一个批次的用量，PCR电泳鉴定图谱。??? 合成寡核苷酸：PAGE纯或HPLC纯，至少满足一个批次的用量，提供该产品的PAGE电泳分析图谱或HPLC分析图谱。??? 探针序列的正确性：应用克隆鉴定的标准DNA杂交鉴定或测序鉴定。??? 纯度和浓度检测：采用电泳方法，电泳图谱没有杂带，目的条带的强度与已知浓度的标准DNA条带进行参比计算其强度。纯度较高的DNA，可用紫外分光光度计进行定量。检验合格后入库，避光、-20以下保存。??? （5）标记物??? 含有激发光波长和发射光波长介于280?680nm的所有荧光分子，HPLC纯。??? （6）Taq DNA聚合酶??? SDS检测，纯度＞95%，具有DNA聚合酶活性，无核酸内切酶活性；具热稳定性，94保温1小时后仍保持50％活性。产品-20保存。??? （7）尿嘧啶糖基化酶（UNG）??? 具尿嘧啶糖基化酶活性，无核酸外切酶及核酸内切酶活性。1U UNG 37处理3分钟后，103拷贝以下含U模板被降解后不能产生扩增产物。产品-20保存。??? （8）RT 酶??? 具有逆转录活性，无核酸内切酶活性，-20保存。??? （9