阿尔茨海默病AlzheimersDiseaseAD是一种在老年期.docVIP

阿尔茨海默病（Alzheimer’s Disease，AD）是一种在老年期起病的中枢神经系统原发性退行性疾病，主要临床表现为学习和记忆能力退化为主的痴呆综合征。一般认为，阿尔茨海默病患者胆碱能神经元退变和其神经元所需营养因子的缺乏是有关系的。表皮生长因子，是已知的神经营养因子家族中重要的一种，它由53个氨基酸残基组成的单链多肽，是由人体内分泌的一种重要的神经营养因子。它可能通过修饰神经元前体细胞[1]，来调节胆碱能神经元，使神经元基因表达升高，突触后长时程增强下降，胆碱能活性提高[2]进而影响阿尔茨海默症患者的学习和记忆能力。本实验通过研究有氧运动对阿尔茨海默病小鼠表皮生长因子的影响，为探讨运动对阿尔茨海默病的防治作用提供研究资料。 1、材料和方法 实验选用健康雄性昆明小鼠20只为对象（体重18-22g），通过在小鼠皮下注射D-半乳糖的方法建立阿尔茨海默病模型[3]，并将其中10只小鼠进行跑台有氧运动[4] （即AD运动组），另外10只小鼠不进行运动（即AD安静组）。有氧运动40天后，将小鼠麻醉,开胸心脏取血;后行小鼠左心室生理盐水和4%多聚甲醛灌流固定,于4℃冰箱在同种固定液中过夜；翌日做冠状连续切片(7μm), 石蜡切片脱蜡至水化后，用SABC法进行免疫组化染色, DAB呈色反应,自来水冲洗，苏木素复染，自来水冲洗返蓝；切片梯度酒精脱水干燥，二甲苯透明，中性树胶封固。使用Motic Images Adwanced显微图像采集分析系统进行图象采集，并记录小鼠海马CA1和CA3区域内表皮生长因子含量数值。将全血离心取上清液后,利用乙酰胆碱酯酶水解底物,其产物可以与显色剂反应生成黄色化合物颜色深浅不同的原理, 通过半自动生化分析仪进行比色定量,反映出水解产物的数量,最终确定乙酰胆碱酯酶活力值.实验数据用SSPS15.0系统统计分析，显著性水平为P0.05。 2、结果 2.1 运动对小鼠大脑海马CA1、CA3表皮生长因子的影响 实验结果显示AD运动组小鼠大脑海马CA1、CA3表皮生长因子阳性细胞数目较AD安静组多，且差异均显著（P＜0.05）有统计学意义，且在海马CA3区，两组差异更为显著（P＜0.01），（表1）。在光镜下可见，表皮生长因子免疫反应阳性细胞的胞浆呈深紫色色颗粒状，在海马各区中散在分布，与AD安静组相比，AD运动组的阳性细胞颗粒数明显增多（图1）。 表 1 小鼠海马CA1、CA3区域表皮生长因子阳性细胞数比较 图1 小鼠海马CA1、CA3区域表皮生长因子阳性细胞分布 2.2 小鼠血清超氧化物歧化酶和乙酰胆碱酯酶活性的变化 实验结果显示,AD运动组小鼠的超氧化物歧化酶活性较AD安静组小鼠升高,差异显著（P＜0.05）。同时，AD安静组小鼠乙酰胆碱酯酶活性也低于AD运动组小鼠差异更为显著,（P＜0.01）。 3、讨论 阿尔茨海默病的胆碱能学说一直都占据着相当重要的地位。有学者指出，在阿尔茨海默病脑内，一些生长因子和细胞因子对胆碱能神经元起着重要的调节作用，如表皮生长因子。表皮生长因子通过颌下腺分泌后，作用于靶细胞上相应受体，使细胞内相关的蛋白质磷酸化，这些磷酸化的蛋白质再活化核内的转录因子，引发基因转录，达到调节生长与分化的作用[5]。近10年的研究表明,胚胎和成人脑组织及外周神经系统中均存在神经干细胞,而且还证实这些神经干细胞在细胞因子、激素和环境因素的作用调控下能在体外分裂,并可进一步分化为神经元或胶质细胞[6]；表皮生长因子在神经干细胞增殖后期发挥作用[7、8]，它能促进干细胞向胶质细胞方向分化。研究发现，表皮生长因子的刺激作用在促进神经干细胞增殖形成细胞克隆方面,较其它因子强。表皮生长因子不只是起到有丝分裂原的作用,也可促进细胞分化并决定细胞分化方向 [9]。 本实验结果显示, AD运动组均较血清中SOD、TChE活性AD安静组高（P＜0.05）。且AD运动组比AD安静组海马表皮生长因子含量有较明显升高（P＜0.05）。理论分析，通过注射D-半乳糖进行AD造模，SOD活性、TChE活性、海马表皮生长因子含量会随着造模过程的进行逐渐降低；而持续的有氧运动使AD运动组SOD活性、TChE活性、小鼠海马表皮生长因子含量较AD安静组明显升高，实验提示适宜的运动会对海马内表皮生长因子含量产生的一种刺激反应，从而提高了AD运动组海马表皮生长因子含量。李鹏飞等的实验表明胚胎大鼠脊髓神经干细胞(ESCSCs)在添加EGF的限定性培养基中可以增殖并长期保持稳定的ESCSCs性状，在添加一些因子的条件下，在体外ESCSCs可以被定向诱导分化为胆碱能神经元[10]。 有氧运动引起海马表皮生长因子含量升高的机制尚不十分清楚。分析适宜的有氧运动能促进脑部神经血管的发育，使微细血管开放，加