枸杞多糖对ⅱ型糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制研究.doc

枸杞多糖对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制研究 孙桂菊，张勇，黄杰1，王少康，孙子林2，黄培林3 （东南大学公共卫生学院营养与食品卫生系，1南京市卫生监督所，2东南大学附属中大医院内分泌科，3东南大学基础医学院病理学与病理生理学系，南京210009） 【摘要】目的：观察枸杞多糖（LBP）对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏的保护作用及机制。方法：用链脲佐菌素（STZ）结合高脂饲料建立Ⅱ型糖尿病大鼠模型，根据胰岛素敏感指数、糖耐量曲线下面积分为模型组，LBP低、中、高剂量组[20、40、80 mg/（kg bw?d）]，同时设立正常对照及正常高剂量对照组，试验期1个月。检测LBP对Ⅱ型糖尿病大鼠血清糖基化终产物-肽（AGEs-P）、糖基化血红蛋白（HbAlc）及肾脏白介素-8(IL-8)含量、肾脏病理变化的影响。结果：LBP可降低Ⅱ型糖尿病模型大鼠血清AGEs-P及血浆HbAlc与肾脏中IL-8含量，肾脏病变明显改善。结论：LBP可降低模型大鼠糖基化终产物的产生，减少肾脏IL-8的分泌，从而预防糖尿病肾病的发生。[营养学报，2006，28（1）：47－50] 关键词：枸杞多糖；糖尿病肾病；糖基化终产物；白细胞介素-8 糖尿病肾病(diabetic nephropathy,DN)是糖尿病慢性血管并发症之一，其发生机制尚无定论，目前研究较多的是组织非酶糖基化终产物(advanced glycosylation endproducts,AGEs)蓄积[1]、醛糖还原酶（aldose reductase，AR）活性改变[2]等。近年来又发现IL-8与DN发病有关[3]。枸杞多糖（Lycium barbarum polysaccharides，LBP）是枸杞子有效成分之一。我们曾报道LBP具有降血糖作用，并可提高模型大鼠的胰岛素敏感指数（ISI）。本研究主要观察LBP对Ⅱ型糖尿病大鼠肾脏保护作用及其机制。 1材料与方法 1.1样品 LBP按相关文献[5]进行提取。 1.2主要试剂、仪器 链脲佐菌素（streptozotocin，STZ），Sigma公司产品；DNA自动扩增仪，Techne Incorporated；EPS 604稳压稳流电泳仪，南京科宝仪器研究所；岛津-10A高效液相色谱仪，日本岛津公司；IS-1001凝胶成像系统,上海复日科技有限公司。 1.3Ⅱ型糖尿病大鼠模型的建立 据文献[4]建立Ⅱ型糖尿病动物模型，其条件为：（1）胰岛素敏感指数ISI=ln[1/(空腹血糖值×血清胰岛素水平)]，ISI≤正常大鼠ISI的均值减1个标准差；（2）葡萄糖耐量实验曲线下面积≥26；（3）空腹胰岛素不小于正常大鼠的均值减一个标准差。 1.4动物分组 将糖尿病模型大鼠随机分为4组，分别为模型组(model)，继续给予高脂饲料，灌胃蒸馏水；LBP低、中、高剂量组，在给予高脂饲料的同时灌胃给予LBP 20、40、80 mg/kg bw。同时设正常对照组和正常LBP高剂量组，喂普通饲料，后者灌胃给予LBP 80 mg/kg bw。持续灌胃1个月后，动物断尾取血测定HbAlc、血清AGEs-P含量，处死后取肾脏进行病理学检查和用免疫组化及逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)进行肾脏IL-8 mRNA含量测定。 1.5指标测定 1.5.1大鼠肾脏IL-8含量的测定： 免疫组化法：试剂盒购自福州迈新生物制剂公司，操作步骤按试剂盒说明书进行。大鼠肾脏组织50～100 mg，用异丙醇-乙醇一步法离心提取RNA，使用晶美生物工程公司的试剂盒，采用RT-PCR技术对肾脏组织中的mRNA进行逆转录扩增，以β-actin作为内参对照，PCR反应产物进行琼脂糖凝胶电泳，在图像扫描仪下观察并扫描入电脑，用统计软件处理，得出目的条带与内参照条带的光密度比值。 1.5.2血清AGEs-P的测定：流动注射分析法[6]。 1.5.3血浆HbAlc的测定： 采用德国拜耳公司的DCA 2000型糖化血红蛋白分析仪测定。 1.6统计方法 数据以x±s表示，采用SAS 6.12统计软件对数据进行统计分析。 2结果 2.1 LBP对血清AGEs和HbAlc含量的影响（表1） LBP低、中、高剂量组HbAlc水平明显低于模型组，但仍高于正常对照组，差异有显著性（P＜0.05）。各实验组大鼠血清中AGE-P的水平，模型对照组，显著高于其它各组（F=12.69，P＜0.05）。 2.2 LBP对肾脏病理学改变的影响（图1A-E） 实验结束时模型组光镜下可见肾小球明显增大，肾小球毛细血管基底膜弥漫性增厚、系膜区增宽，近端肾小管上皮细胞呈现大量空泡变性。LBP低、中、高剂量组与模型组相比，肾小球系膜区增宽、基底膜增厚均较轻，肾小管空泡变性较少。 2.3 LBP对模型大鼠肾脏IL-8含量影响（图2 A-E） 2.