生物芯片在肺癌研究中的应用.docx

生物芯片在肺癌研究中的应用肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤之一，目前，肺癌的研究焦点主要集中于揭示肺癌的发病机制，探讨更好的诊断和治疗方法。然而，传统建立在电泳基础上的基因表达，序列测定，突变和多态性检测等研究方法，如PCR法、mRNA差异显示、Northern blotting、western blotting等，由于费时、费力、信息量少且不利于自动化，在一定程度上限制了肺癌的深入研究。科学家们迫切需要一种新的方法，能以大规模、高通量的方式研究成千上万个基因在各种生理、病理状态下的表达，预测基因的功能，辨明基因间的相互作用和调控网络。生物芯片就是这种背景下诞生的。它的出现是分子生物技术的重大突破，结合了人类基因组计划提供的大量信息的生物芯片，使我们能够在全部基因组水平上进行研究，其精细度可达到单个细胞中的一个拷贝。生物芯片不仅使我们从了解单个相关基因走向探讨多个基因构成的表达模式，而且使我们可从核酸、基因、蛋白所构成的复杂系统着眼进行研究，大大扩大了研究的深度和广度。目前生物芯片主要包括基因芯片、组织芯片、蛋白芯片等，其中以基因芯片研究最多。　　1? 基因表达谱的研究??? 　　肺癌主要分为两大类，一类是非小细胞肺癌，包括肺鳞癌、肺腺癌、大细胞肺癌等，约占80%；另一类是小细胞肺癌，约占20%。肺癌基因表达谱的差异隐含了肺癌在发生发展过程中，增殖周期中不同的阶段，不同的病理分期，不同的生物学行为以及在不同的诱导环境下的分子基础，为我们进一步研究肺癌的发生机制，指导诊断与治疗提供重要的线索。??? 　　Cojocara等［1］利用寡核苷酸芯片对12例非小细胞肺癌组织，6例正常的癌旁组织和5例正常肺组织的混合RNA进行了基因表达的检测，结果显示肿瘤组织与正常组织的表达谱显著差异，通过数据分析，发现了许多与肺癌发生发展密切相关的基因，这些基因功能的深入研究有可能为我们提供新的药靶和敏感的肿瘤标记物。??? 　　此外，有学者分别对肺鳞癌、肺腺癌、细支气管肺泡癌等进行了更详细的研究。如Wang等［2］利用CDNA削减杂交和CDNA微阵列相结合的方法来鉴定肺鳞状细胞癌中差异表达基因，结果发现17个基因差异表达，包括4个新发现基因，同时鉴定出组织特异性基因、肿瘤特异性基因等。国内的何志巍［3,4］、张恒等［5］也对肺鳞癌进行了相关的研究。Goodwin等［6］探索了细支气管肺泡癌与良性肺组织的基因表达模式。学者们通过对肺腺癌的研究，发现其分子亚型的存在［7,8］。??? 　　小细胞肺癌虽然对化疗敏感，但易产生耐药，且在诊断时，常已发生广泛转移，因此探索小细胞肺癌的发病机制，寻找早期敏感的肿瘤标记物和新的药靶非常重要。Bangur等［9］结合CDNA削减杂交和CDNA微阵列的方法分析了32例小细胞肺癌组织和正常组织的表达谱，鉴定出在小细胞肺癌中高表达的209个基因，它们涉及细胞周期调节、细胞凋亡、蛋白合成和分解，转录基因和癌基因等，其中，他们对9个显著高表达基因进行了进一步分析，这些基因特征性报道将有助于发掘它们诊断、预后、治疗的潜能。??? 　　近年来，利用基因表达谱进行预后预测和疗效评价也取得了较大进展。如Beer等利用基因表达谱对Ⅰ期肺腺癌病人的生存进行预测，鉴别出高危组和低危组，使得高危组可从随后的辅助治疗中获益［10］。??? 　　综上所述，肺癌的基因表达谱使我们对肺癌有了一个全新的认识，这些必然导致早期诊断和个体化治疗的进一步发展。　　2? 分子分型的研究??? 　　目前，肺癌的临床分期是TNM分期，病理的分类依据是细胞组织来源，形态学、蛋白标记物和生物学行为等标准，显然基因表达谱则是以上所有这些的分子基础，从基因水平分类肺癌可以在传统的分类基础上发现新的类型或亚型，并且可以为更真实准确的综合评估肺癌患者提供客观依据。??? 　　Arindam等［8］利用基因芯片对127例肺腺癌、21例肺鳞癌、20例类癌、6例小细胞肺癌、17例正常肺组织和12例肺转移腺癌组织进行分子分型的研究。结果发现它们都各自归属到不同类中，与传统的分类方法一致，说明基于基因芯片的分类方法是可靠的。研究发现除腺癌不能以单一套分子标记划分外，其他肺癌均有一套特异的标记基因。正常肺组织与肿瘤组织是截然不同的组，标记基因包括TGFΒ受体Ⅱ,tetranectin,ficplin3等。小细胞肺癌与类癌都高表达神经内分泌基因，但它们相同的标记基因很少，类癌是由一套明显不同的基因组所定义的，提示它是肺癌中的一个明显不同的分支。而小细胞肺癌高表达PCNA、MCM2 MCM6、胸腺素β和细胞周期抑制因子p18等。在鳞癌中，与鳞状细胞分化的基因高表达，如细胞角蛋白、p63等。腺癌异质性很大，不能以单一套标记基因划分，经过进一步的数据处理，它们被分成4个亚型。C1高表达细胞