实验二实验动物的一般操作技术.doc

实验二 实验动物的一般操作技术 一 实验目的学习毒理学实验中有关动物实验的基本操作技术和方法，掌握实验动物的选择、分组原则和方法、染毒方法，以及生物材料的采集等基本内容。 实验内容1.健康动物的选择在毒理学试验中，无论选择哪种种属品系的动物进行实验，均要求选择健康的实验动物。即要求动物外观体形丰满，被毛浓密有光泽、紧贴体表，眼睛明亮，行动迅速，反应灵活，食欲及营养良好。选择时重点检查以下项目： 　　（1）眼睛：明亮，瞳孔双侧等圆，无分泌物。（2）耳：耳道无分泌物溢出，耳壳无脓疮。（3）鼻：无喷嚏，无浆性粘液分泌物。（4）皮肤：无创伤，无脓疮、疥癣、湿疹。（5）颈部：要求颈项端正，不能有歪斜。（6）消化部：无呕吐、腹泻，粪便成形，肛门附近被毛洁净。（7）神经系统：无震颤、麻痹。若动物（大鼠、小鼠）出现圆圈动作或提尾倒置呈圆圈摆动，应放弃该动物。（8）四肢及尾：四肢、趾及尾部没有红肿及溃疡。 2.实验动物的性别鉴定动物性别不同对不同毒物的反应可能有一定差异，因此，要根据实验要求选择性别。一般实验如对性别无特殊要求者，宜选用雌雄动物各半。 　　（1）大鼠/小鼠：主要根据肛门与生殖孔间的距离进行区分，间距大者为雄性，小者为雌性。成年雄鼠处卧位时可见到睾丸，雌性在腹部可见乳头。 　　（2）豚鼠：用一只手抓住豚鼠颈部，另一只手扒开靠近生殖器孔的皮肤，雄性动物在圆孔中露出性器官的突起，雌性动物则显出三角形间隙，成年雌性豚鼠胸部有两个乳头。 　　（3）家兔：将家兔头轻轻夹在实验者左腋窝下，左手按住腰背部，右手拉开尾巴并将尾巴夹在中指和无名指中间，然后用拇指和食指把生殖器附近的皮肤扒开。雄兔可见到圆锥形稍弯曲的阴茎（但幼年雄兔看不到明显的阴茎，只能看到圆孔中有凸起物，即是阴茎）。雌兔则为一条朝向尾巴的长缝，呈椭圆形的间隙，间隙越向下越窄，此即为阴道开口处。 3.实验动物的抓取固定　　（1）小鼠的抓取方法：先用右手抓取鼠尾提起，置于鼠笼或实验台上向后拉，当其向前爬行时，用左手拇指和食指抓住小鼠的两耳和颈部皮肤，将鼠体置于左手心中，后肢拉直，以无名指按住鼠尾，小指按住后腿即可。 　　（2）大鼠的抓取方法：大鼠的抓取基本同小鼠，只是大鼠比小鼠性情凶猛，为避免咬伤，操作时可带上帆布或棉纱手套。 　　（3）豚鼠的抓取方法：豚鼠胆小易惊，在抓取时要稳、准、迅速。用手掌迅速扣住鼠背，抓住其肩胛上方，以拇指和食指环握颈部，另一只手托住臀部即可。 　　（4）兔的抓取方法：用右手抓住兔颈部的毛皮并提起，然后左手托住其臀部或腹部，让其体重的大部分重量集中在左手上。注意不要抓取双耳或腹部。 　4.实验动物的编号和标记方法 　　（1）称重：根据实验的不同要求，选择一定数量的大、小鼠，体重要求在同一组内、同性别动物体重差异应小于平均体重的10%，不同实验组间同一性别的动物体重均值差异应小于5%。 　　（2）编号：动物编号方法有多种，大、小鼠常用方法如下： 　　1）染色法：一般采用染料（如苦味酸酒精饱和液）涂擦动物皮毛标记的方法进行编号。具体做法是：用毛笔或棉签蘸取染料溶液涂于动物的不同部位，以苦味酸黄色斑点等染料标记来表示不同号码。一般习惯涂染在左前腿上为1，左腰部为2，左后腿为3，头部为4，背部为5，尾基部为6，右前腿为7，右腰部为8，右后腿为9。如果动物编号超过10，需要编10～100号码时，可采用在上述动物的不同部位，再涂染另一种涂料（如0.5%中性红或品红溶液）斑点，即表示相应的十位数，即左前腿上为10，左腰部为20，以此类推。例如在左前腿上标记有红色和黄色斑点，表示为11，如果红色标记在左前腿上，而黄色标记在左腰部，则为12，以此类推。 　　2）剪耳法：在耳朵不同部位剪一小孔代表某个号码。常以右耳代表个位，左耳代表十位。或与另一染色法配合使用，右耳剪孔代表十位，左耳代表百位。 　　3）烙印法：用刺数钳在动物耳上刺上号码，然后用棉签蘸着溶在酒精中的黑墨在刺号上加以涂抹，烙印前最好对烙印部位预先用酒精消毒。 　　4）号牌法：用金属的牌号固定于实验动物的耳上，大动物可系于颈上。 5.实验动物的分组为了得到客观的剂量-反应关系，应将一群动物按统计学原则随机分配到各个试验组中。可按随机数字表方法进行随机分组。 6.实验动物被毛去除方法方法有三种：剪毛、拔毛和脱毛。 　　（1）剪毛：固定动物后，用粗剪刀剪去所需部位的被毛。在剪毛时，要把剪刀贴紧皮肤剪，不可以用手提起被毛，以免剪破皮肤。剪下来的被毛集中在一个容器内，勿遗留在操作台周围。 　　（2）拔毛：在兔耳缘静脉注射或取血时，以及给大、小鼠进行尾静脉注射时采用。用拇指、食指将局部被毛拔去，以便于操作。 　　（3）脱毛：脱毛系指用化学药品脱去动物的被毛，适用于无菌手术的准备以及观察动物局部皮肤血液循环和病理变化。常用硫化钡或