抗赭曲霉毒素A抗体的研制与鉴定.pdfVIP

维普资讯 畜牧兽医学报，1881，22(5)，235—237 ActaVeterinariaetZootechnicaSinica 抗赭曲霉毒素A抗体的研制与鉴定 孙葸兰 牛钟相 朱瑞 良 (山东农业大学牧医系) 摘 要 赫曲霉毒素A(O~hratoxia虬简称OA)与牛血清 白蛋白(BSA)结合后，成为半抗原载体 复合物，即为一种很好的抗原，用这种人工结合抗原与佐jfI混合免疫家兔，便可 产 生抗OA 的抗体，这种抗体对．9A具有特异性。用ELISA检 体的灵敏度为2·5eg／m 的0A检样。本 文主要介绍了抗原的偶合，勇．疫血清的制备及抗体的效价滴定。 。 关■一 赭曲霉毒素A，抗原，抗体，特异性 赭曲霉毒素是由曲霉菌属及青霉菌属中的一些菌株产生的一组有毒代谢产物(3、5)， 在本组毒索中，OA的毒性最强，为一种肾脏毒。由于产毒真菌分布广，因此，在各种 农产品中常产生大量毒素(6、7)，赭曲霉毒素在国外很早就被引起高度重视，已有许多 论文报道(3、5、8)。 检测赭 曲霉毒素的方法与其它真菌毒素一样，一般是用化学分析及生物学检测法， 或这两种方法并用。这些方法有的缺乏特异性，有的灵敏度不高，为了克服上述 的不 足，我们研究了用免疫检测技术对赭曲霉毒素进行超微量的分析测定。本文对偶合抗原 的制备，抗血清的制备方法，抗赭曲霉毒素A抗体的特异性及其他免疫化学特性进行了 详细介绍。 材 料 和 方 法 一 、 材辩 1．赭曲霉毒素A：由本项研究课题组制备、鉴 定(2]。2．牛血清 白蛋 白：购 自中科院生物物理所生化试剂厂。3．福氏完全佐剂t本教研室配制。4．家兔t取 自山东农大牧医系动物房。5．SephadexGso。购 自上 海化学试剂厂。6．羊抗 兔 IgG- HRP。购 自北京生物制品研究所。 =、OA-BSAIII含■抗曩的■鲁 按2moleOA与 1moleBSA的比例，称取OA 0．403mg和BSA 33．5mg，分别溶于5mlplil0．4、0．1M的．PB液，将 5mlBSA液滴 加于5ml0A液中 (边加边搅拌)，然后再搅拌3小时，放 6℃，2天。将OA—BSA 液装透析袋，用pH8．O4，O．1M PB液透析过夜 去除游离的0A。收集OA—BSA液， 用聚乙二醇 (PEG，MW6000)浓缩至原量，用紫外可见光分光光度计 (岛津120)测 定0A-BSA的紫外全波吸收值。根据OA值计算克消光系数，再计 算OA-BSA的偶合 率 。 三、兔抗0A血清的一鲁 OA—BSA2ml(1．251mg／m!)与2ml福 氏完全佐剂和 ’奉戈承囊 白菜誓囊授审曩 ·试奠中得舅张缨学翻戟授，集家ll，徐 花同志的协助，谨表感谢。 ”车文予1989年9月27日收稿。 维普资讯 畜 牧 兽 医 ： 报 !、巷 2ml吐温一2O混合完全乳化，按2。5n¨，只剂量接种家兔。采用脊 背、四肢 足 垫、胭窝 皮下多点注射。问隔20天，改用不完全佐剂，以2mr／只剂量注射，注射 部位 ，连 续免疫 3次，问隔均为2O天。第 5次改用OA—BSA复合物0．5ml／只 静脉 加强饱瘦， 一 周后采仇，用问接m凝 厶测定 n【『．清效价，JiL『清效价达 1：32，然后，心 肌采 ，分离 血清，一20℃保存。 四、IgG的提取 川5O％,~It3．3％饱 l硫酸钹，从 帆清 中粗提抗OA IgG，透 析 (用 生理盐水 )后， 用Sephadex—G50柱 析 (用pH7．6，0．15M PBS洗啦 )进… 纯 化，然后用紫外一一可见分光光嚏计测定()D 280nm值，根据OD篦计算蛋 白质含 }。 五、OA间接酶免疫法灵敏度测定 按常规EL1SA操作：OA浓