粪大肠菌群及多管发酵法检测探析.docVIP

粪大肠菌群及多管发酵法检测探析 　　摘 要：随着人们环保意识的增强，加强环境中各种细菌的检验、掌握环境污染状况，受到越来越多人的关注。粪大肠菌群检测是水质监测的主要内容之一，有助于环境评定及卫生监督工作的顺利开展。该文对粪大肠菌群及多管发酵法检测进行探讨，以供参考。 　　关键词：粪大肠菌群 多管发酵法 检测 探析 　　中图分类号：X832 文献标识码：A 文章编号：1674-098X（2017）01（b）-0093-02 　　粪大肠菌群是评定水体受粪便污染程度的重要指标，注重对其检测在卫生学上具有重要意义。多管发酵是检测粪大肠菌群的方法之一，对其进行研究，有助于提高检测结果精度，为其更好地推广应用奠定基础。 　　1 粪大肠菌群检测价值 　　粪大肠菌群指在44.5 ℃温度条件培养下，24 h能发酵产生乳糖产酸产气需氧及兼性厌氧革兰氏阴性无芽孢杆菌。其主要生存在人与温血动物肠道中，与粪便一起排出体外，其数量直接反映水体受粪便污染程度。我国于1992年将粪大肠菌群检测纳入生活饮用水检测指标，同时，于2014年6月对食品安全国家标准进行修订，将粪大肠菌群列为微生物检测的强制检测内容。粪大肠菌群检测价值体现在诸多方面，不仅为水体的评定提供参考，而且在卫生监督工作中发挥重要作用，有助于人们加强对粪便的管理，改善环境卫生条件，为人们的生命健康提供保障。 　　2 多管发酵法检测研究 　　2.1 培养基及试剂制备 　　检测中使用的单倍乳糖蛋白胨培养液制备方法为：分别取氯化钠、乳糖、牛肉浸膏、蛋白胨各5 g、5 g、3 g、10 g加热溶解在1 000 mL的蒸馏水中，将溶液的pH值调节为7.2～7.4，而后向其中加入1 mL 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装在试管中使用高压灭菌器在115 ℃温度条件下灭菌20 min，在冷暗处储存，以备后用。配置3倍浓缩乳糖蛋白胨培养液的方法，与配置单倍乳糖蛋白胨培养液的方法相似，区别在于除蒸馏水外，将各组分的用量增加3倍。 　　EC培养液的配置方法为：使用5 g氯化钠、1.5 g磷酸二氢钾、4 g磷酸氢二钾、1.5 g胆盐三号、5 g乳糖、20 g胰胨，1 000 mL蒸馏水加热溶解，分装在含油玻璃导管的试管中。放置于高压蒸汽灭菌器中将温度调制115 ℃进行20 min的灭菌处理，灭菌后将pH调为6.9。 　　为保证检测结果存放培养基时应注意：处于密封瓶中的脱水培养基成品应在温度低于30 ℃、湿度低的暗处存放，尤其防止阳光直射。同时，还应防止液体蒸发及杂菌侵入，当发现培养液体积明显改变，或颜色改变时应禁止使用。 　　2.2 检测步骤 　　（1）水样接种量的确定。 　　充分混匀水样，结合水样污染程度，明确水样接种量，尤其应保证各样品使用至少3个不同水样量接种，保证同一接种水样量有5管。未受污染水样接种量取0.1 mL、1 mL、10 mL。依据污染程度受污染水样接种量取0.01 mL、0.1 mL、1 mL。另外应注意，当接种体积为10 mL时，应在试管中装3倍浓度5 mL乳糖蛋白胨培养液，当接种量≤1 mL时可使用10 mL普通浓度的乳糖蛋白胨培养液进行接种。 　　（2）初发酵实验。 　　在盛有乳糖蛋白胨培养液发酵管中接种水样，在（37±0.5）℃温度条件下，培养（24±2）h。操作中应注意，水样加入前使用酒精灯消毒培养管管口，加入水样后消毒封口。发酵24 h后观察培养管，阳性判别的标准为培养管既产气又产酸，即有气泡产生且颜色由紫色变为黄色为阳性。当导管气泡不够明显时，可用手轻拍，看是否有气泡产生。 　　（3）复发酵实验。 　　取判定为阳性的发酵管轻微振荡，使用灭菌棒或3 mm接种环将培养物转移到CE培养液中。在（44.5±0.5）℃温度条件下培养（24±2）h。接种操作完成后在30 min内将发酵管放进水浴中。培养后及时进行观察，当发酵管产气则可判定为粪大肠菌群阳性。 　　（4）结果计算。 　　根据不同接种量发酵管阳性结果数目，查阅相关表格得出每升水样含有的粪大肠菌群。 　　3 多管发酵法质量控制 　　使用多管发酵法检测粪大肠菌群时，所受的影响因素较多，稍有不慎容易导致检测结果的不准确，因此，为保证检测结果的准确性应注重从人员技能、计量器、培养条件、培养基、样品均匀性等方面采取相关措施，做好质量控制。 　　3.1 提高检测人员水平 　　检测中检测人员不规范操作往往给检测结果产生直接影响，因此，为避免检测结果受检测人员水平的影响，一方面，检测作业前应组织检测人员加强检测规范的学习，使其明确各检测步骤及相关检测参数。另一方面，做好检测培训工作，讲解检测的方法与技巧，使参与检测的人员明确检测中的重点，尤其防止违规行为的出现。 　　3.2 保证实验设备质量