左静卫生厅推荐科学技术进步奖公示-河北医科大学第四医院科研处.DOC

科学技术进步奖公示内容 项目名称：细胞增殖相关蛋白质和microRNA对胃癌化疗耐药和临床预后的影响及调控机制 二、推荐单位：河北省卫生和计划生育委员会 三、 1、 （1）课题探讨了临床病理的关系。密度癌旁组织a在胃癌组织、癌旁组织及正常胃粘膜组织中的表达，分析其在不同组织中表达水平的差异，及其Western Blot检测沉默EphA2后MGC803细胞中EphA2 mRNA和蛋白表达水平的高边。应用MTT检测沉默EphA2前后细胞增殖的改变，FCM检测细胞周期分布和细胞凋亡的改变。分析沉默EphA2对胃癌MGC803细胞增殖和凋亡，以及细胞周期的影响。向胃癌细胞SGC7901分别转染microRNA-33a或其抑制剂，建立microRNA-33a高表达和基因敲除两种细胞系。应用FCM检测两种胃癌细胞周期的变化，应用Transwell 小室检测两种胃癌细胞在细胞迁移上的差异，分析microRNA-33a在胃癌细胞增殖和转移中的作用。采用荧光素酶报告基因检测转染microRNA-33a后胃癌细胞中细胞周期调控基因CDK6、CCND1和PIM1表达水平的变化，分析microRNA-33a是否通过CDK6、CCND1和PIM1对胃癌细胞周期进行调控。 （3）microRNA在胃癌耐药中的作用及其机制的研究。采用MTT法检测细胞的药物敏感性；应用microRNA芯片进行表达谱分析；运用生物信息学对筛选出的microRNA进行靶点预测和生物学进程分析。分析胃癌多药耐药细胞株SGC7901／DDP细胞microRNA表达谱，发现RNA-200c比microRNA-33a等microRNA的变化更为明显。RT-PCR法检测SGC790l／DDP细胞及其亲本细胞SGC7901中microRNA-200c的表达差异，同时检测SGC7901／DDP细胞转染 microRNA-200c前体片段后microRNA-200c表达的变化。应用MTT法检测转染后SGC7901／DDP细胞对DDP药物敏感度的改变。分析microRNA-200c对药物敏感性的影响。Western印迹法检测SGC7901/DDP及其亲代SGC7901细胞Bax、E-cadherin、Bcl-2、PTEN、p-Akt 及总Akt蛋白的表达，并检测转染microRNA-200c后这些因子表达水平的变化。应用 Akt 通路抑制剂LY94002处理SGC7901/DDP细胞，抑制Akt磷酸化，检测处理后细胞对顺铂的敏感性。探讨microRNA-200c对人胃癌耐药SGC7901/DDP细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制。 （4）格尔德霉素抑制胃癌细胞增殖作用的研究。采用MTT法检测格尔德霉素对MGC-803细胞增殖的抑制作用， FCM测定细胞周期变化及细胞凋亡率，姬姆萨染色法观察细胞形态学改变。IHC及FCM分析EphA2、survivin及Caspase-3蛋白表达水平的变化。分析格尔德霉素胃癌MGC803细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。 四、 排名 姓名 技术职称 工作单位 对成果创造性贡献 1 副教授 河北医科大学第四医院 课题负责人，论文撰写 2 副河北医科大学第四医院基因转染实验，论文撰写 3 河北医科大学第四医院 流式细胞术分析，论文撰写 河北医科大学第四医院 5 刘亮 副教授 河北医科大学第四医院基因转染实验，论文撰写 6 教授 河北医科大学第四医院收集，临床研究指导，论文撰写 7 周欣亮 住院医师 河北医科大学第四医院 ，论文撰写 8 主治医师 河北医科大学第四医院 流式细胞术检测，论文撰写 9 教授 收集，临床研究指导，论文撰写 10 左连富 教授 河北医科大学第四医院 流式细胞术数据分析 、及经济社会效益 1、主要完成单位：河北医科大学第四医院 2、创新推广贡献、推广应用情况：EphrinA1通过与信号蛋白相互作用，发挥调节细胞增殖、分化和移动的作用。许多种类的癌前病变和癌组织中存在EphA2过表达，EphA2在癌细胞中的高表达可以促进肿瘤生长和转移，导致患者预后不良。因此，EphA2表达水平可以用来预测癌症患者的预后, EphA2在正常细胞与癌细胞中的差异表达也表明其作为治疗靶标的重要性。目前国内外有关EphA2的研究主要集中在乳腺癌、黑色素瘤、卵巢癌、肺癌、尿路上皮癌等，涉及的细胞通路包括MAPK、FAK和PI3CK等信号通路。然而国内外关于EphA2在胃癌中的研究有限，未检索到EphA2与细胞增殖相关因子的研究。本研究报道了胃癌组织中EphA2、EphrinA1异常表达胃癌转移。 其作为胃癌预后耐药指标的可能性sp90底物蛋白活化，诱导细胞周期阻断，从而起到抑制肿瘤细胞的作用。本项目首次发现 六、代表性论文专著目录 本项目由河北医科大学