Ⅰ.大鼠心肌Na-%27%2b--Ca-%272%2b-交换激动剂的正性变力作用增强Ouabain的强心作用%3bⅡ.神经肽Y对大鼠心室肌细胞离子通道的影响.pdf

山西医辩大学博士拳雠论文 摘要 第一部分 Ouabain的强心作用 心肌细胞Na+．Ca2+交换是心肌细胞膜上一种双向的、生电性的离子交换机制，其活动 上讲，如果激动心肌Na+．ca2+交换(包括前向和反向)将同时有助于心肌的收缩和舒张，并 有可能成为改善心肌变力性的新途径。我们在前期工作中已利用膜片钳技术证明，IK通道 另一个值得注意的问题是，洋地黄类药物的强心作用是与Na+．ca2+交换活动密切相关的， 抑制剂的联合应用，可能对心肌变力性产生更有益的效应。这是～个以前从未研究过的问 题，也是一个颇具临床应用前景的问题。为此，我们利用离体心脏灌流和离体乳头肌张力 测定法，首先观测了Na+_Ca2+交换激动剂对大鼠乳头肌变力性和离体心脏泵功能的影响， 可能发生的变力性和心电活动变化的机制，我们利用离子荧光测定系统同步观测了药物干 预对大鼠心肌细胞钙瞬变和缩短的影响，利用膜片钳技术观测了药物干预对心肌细胞动作 电位和膜电流的影响。 方法 实验动物：为2．3月龄的清洁级Wistar大鼠，购自山西医科大学实验动物中心。 乳头肌张力测定：常规方法分离左室乳头肌，测定指标为乳头肌收缩主动张力(Tc) 和舒张时TC下降75％所需的时间(T75)。 率(+dp／dtm。)和左室压最大下降速率(-dp／dtm。)。 离子荧光测定法：常规酶法分离成年大鼠心室肌细胞，用Fura-2／AM对细胞进行染色， 利用TILL 存于电脑，使用TILLvision 4．0软件进行分析。实验观测的指标为钙瞬变荧光比值F34胛380、 细胞缩短、钙敏感性、钙瞬交升高到峰值的时间(TP)和钙瞬变峰值下降75％和90％的时 T 山西医科夫孛Ill士掌位论文 『司(RTs和Rgo)o 动作电位测定：常规酶法分离成年大鼠心室肌细胞，采用膜片钳的电流钳模式记录·15 位时程(APD50)和复极90％的动作电位时程(APD90)。 膜电流测定：常规酶法分离成年大鼠心室肌细胞，采用膜片钳的电压钳模式记录膜电 流。膜电流的大小以电流密度，即单位膜电容的膜电流表示。 结果 并使T75延长，(P0．05，n=4)。 E．403 1．0 0．1 赖性地升高，E一403lgmol／L和dofetilideI_tmol／L以上浓度时，各指标的变化均有统 p．mol／L时， 有统计学意义(n-7)。 2．E．403l和dofemidc对Ouabain强心作用的影响 O．5岬ol／L E．403l则使乳头肌TC显著升高，T75明显缩短(P0．05，n_6)。 0．59mol／L 合并应用3．0}Imol／LE．4031后，则分别上升到144％、129％和136％。 合并应用0．3肛mol／Ldofetilide后，则分别上升到134％、172％和177％。 3．E．403l和dofetilide对Ouabam引发心律失常的抑制 的条件下，以3．0lanol／L (n-3)。同时加入O．3dofetilide灌流后，30分钟内未见期前收缩发生。 pmol／L 0．5 pmol／L 高至246士30，但无统计学意义；O．3¨moYL Ixmol／L) 后，钙瞬变被抑制至243士3l“l_5)。 O．5 Ouabain使大鼠心室肌细胞缩短由6．8士0．6Ixm升高至8．5士O．9“m，但无统 p．mol／L Ⅱ