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章 节 第八章 亲和纯化 2学时 学习目的和 教学要求 1．了解生物亲和作用、亲和层析 2．了解亲和膜、亲和错流过滤、亲和双水相分配、亲和反胶团萃取及亲和沉淀 教 学 重 点 难 点 重点：亲和层析的相关技术和过程理论 难点：生物亲和作用、亲和层析 教学进程（含章节教学内容、学时分配、教学方法、辅助手段） 要求掌握的内容 1.什么是亲和作用? 2.亲和作用的本质包括哪些方面? 3.影响亲和作用的因素? 4.亲和色谱的原理是什么? 5.亲和色谱的配基有哪些? 6.亲和色谱的应用有那些方面? 7.亲和膜色谱的原理和特点 8.除亲和色谱外,其他亲和分离技术有哪些? 8.1 生物亲和作用 8.2 亲和色谱 8.3 亲和膜色谱 8.4 其它他亲和分离技术 8.5 亲和吸附 主要参考资料 《生物分离工程》孙彦主编，化工出版社，2004 《生物分离工程》第二版，孙彦主编，化工出版社，2007 《现代生物分离工程》，曹学君主编，华东理工大学出版社，2007 备 注 多媒体教室 8.1 生物亲和作用 一、生物亲和作用的概念 生物物质，特别是酶和抗体等蛋白质，具有识别特定物质并与该物质的分子相结合的能力。这种识别并结合的能力具有排他性，即生物分子能够区分结构和性质非常相近的其他分子，选择性地与其中某一种分子相结合。生物间的这种特异性相互作用称为生物亲和作用(bioaffinity)或简称亲和作用(affinity)，通过亲和作用发生的结合称为特异性结合(specific binding)或亲和结合(affinity binding)。利用生物分子间的这种特异性结合作用的原理进行生物物质分离纯化的技术称为亲和分离(affinity separation)或亲和纯化（affinity purification），其典型代表为亲和色谱(affinity chromatography)。 二、亲和作用的本质 参与亲和作用的两个分子(或物质)中，其中之一为蛋白质的情况占绝大多数，或者两者均为蛋白质。蛋白质是高分子化台物，种类繁多，结构复杂。因此，蛋白质参与亲和作用的机理向不完全清楚。一般认为，蛋白质的立体结构中含有某些参与亲和结合的部位，这些结合部位呈凹陷或凸起的结构，能与该蛋白质发生亲和作用的分子恰好可以进入到此凹陷结构中，或者该蛋白质的凸起部位恰好能够进入与其发生亲和作用的分子(一般也是蛋白质)的凹陷部位，就象钥匙和锁孔的关系一样。蛋白质分子表面的凹陷或凸起部位与整个蛋白质分子相比要小得多，例如，球形蛋白质的直径一般为几纳米到十几纳米，而结合部位的直径一般为1~2nm。由于不是整个分子或物质参与亲和结合，亲和作用的分子（物质)对可以是：大分子-小分子，大分子-大分子，大分子-细胞，细胞-细胞。 具有亲和作用的分子(物质)对之间具有“钥匙”和“琐孔”的关系是产生亲和结合作用的必要条件。除此之外，还需要分子或原子水平的各种相互作用才能完整地体现亲和结合作用。 1.静电作用 天冬、谷、半胱氨酸、C末端的羧基带负电荷 精、赖、组氨酸、N末端的a-氨基带正电荷 2.氢键 O-H-O（0.26nm)或O-H-N （0.28~0.30nm) 3.疏水性相互作用 一个分子中含有芳香环或烃基链等疏水基 4.配位键 Cu2+、Zn2+、Ni2+ 5.弱共价键 氨基—甲酰基的Schiff碱、醛基—羟基的半缩醛基 三、影响亲和作用的因素 离子强度 提高离子强度降低或消除氢键作用，增大疏水作用。 pH 适当的pH值下亲和作用较高，在其它pH值下亲和作用减弱或完全消失。 抑制氢键形成的物质 脲和盐酸胍的存在可抑制氢键的形成。脲和盐酸胍（4mol/L）是蛋白质的强烈变性剂。 温度 温度升高静电作用、氢键及金属配位键减弱，但疏水作用增强。 离液离子 在SCN—，I—和CIO4—等离子半径较大的离液阴离子存在下，疏水相互作用降低。 螯合剂 如果亲和结合作用源于亲和分子对与金属离子形成的配位键，则加入乙二胺四乙酸(EDTA)等螯合剂除去金属离子，可使亲和结合作用消失。 四、亲和作用体系 高度特异性 抗原+单克隆抗体 酶+底物、产物、抑制剂 荷尔蒙+受体蛋白 核酸+互补碱基链链段、核酸结合蛋白 群特异性 酶+辅酶 凝集素+糖、糖蛋白、细胞、细胞表面受体 酶、蛋白质分子+肝素 免疫球蛋白+A蛋白、G蛋白 8.2 亲和色谱（affinity chromatography） ?一、 原理 亲和色谱是利用亲和吸附作用分离纯化生物物质的液相色谱法。亲和色谱的固定相是键合亲和配基的亲和吸附介质（亲和吸附剂），流动相为液体。由于目标产