番茄／番茄嫁接体发育过程中的过氧化物酶同工酶.pdfVIP

维普资讯 3 一； 园 艺 学 报 2000，27(51：340～344 Aeta Hort~bullarae5~nica 番茄 ／番茄嫁接体发育过程 中的过氧化物酶 同 工酶 卢善发 (中国科学 院植物研 究所 ．北京 1000931 捕 要 ：分析番茄 ／番茄嫁接体发育过程 中的过氧化物酶 同工酶 ．发现嫁接接 台部酶谱和 活性变化与刨伤处理及对 照不 同。嫁接及创伤处理 均可诱 导同工酶产生 ，但接 台部 同工酶 的 产生往往早 于创伤部位 有 的酶带 的消失隋况也与创伤不 同 嫁接及创伤处理前 6d，酶活性 逐渐增加 ．变化类似 ．均 明显高于对照，随后接合部酶活性逐渐 高于创伤处理 ．第 】5天，酶 活性下降且低于伤 口 可 见嫁接 体发育过程 中，过 氧化物酶 的重要作用不仅局限于伤 口的愈 合 。对嫁接体发育和伤 口愈合 的关系及过氧化物酶 的作用进行 了讨论 = 关键词：番茄：嫁接：创伤；过氧化物酶 织 砬 中图分类号：Q9465；S6412oJ文献标识码：A 文章编号：0513—353X (2000)05—0340-05 植物嫁接历史悠久 ，但嫁接亲和性机制等研究不够深人… ，限制 了嫁接技术 的应用范 围。过氧化物酶具有氧化 吲哚 乙酸：：、促进 术质化 和对 感病与机械损伤等伤 害 的保 护 等多种作用 近年来其功能 已逐渐在分子水平得 以揭示 ，但在嫁接体发育过程 中的 作用至今仍不清楚 。本试验 旨在通过对酶谱和活性变化 的研究 ．探讨过氧化物酶 的作用 。 1 材料与方法 11 材料 番茄 (Lycopersiconesvu]~entum Mil1) ‘中蔬 4号 ’，播种于营养土 中，两片子叶完全展 开后定植 。当植株生长到 6～7片真 叶时．在第 2和第 3真 叶之 间用劈接法进行 自体嫁接 (嫁接处理 )或按与嫁接相 同的倾斜角度切割至 1／2茎处后在切 口插人双层 paralfilm膜并 包扎 (创伤处理)一以来经处理 的材料为对照 共培养 3批材料 。每批材料嫁接 、创伤处 理及对照各 8O株 ，处理后 1、3、5、7、9、I2和 15d，以 lO株为一样 品，取处理部位约 0．7cm长的茎段作进一步分析 。 12 方 法 酶液提取 ：按重量与体积 比 1：3加^提取液 (0．05otol·L～ Tris—HCI缓冲液 ．DH68， 含 8％ PVP，10 otol·L 琉基 乙醇 ，l0。mol·L EDTA)，冰浴研磨=以 12000r／min于 3℃离心 15min。上清液 即为原酶液 ．用于下述聚丙烯酰胺凝胶 电泳或酶活性测定 。 电泳分析 ：按文献 [8]所述方法进行 ，条件 为 ：4％浓缩胶 (pH6．8)，10％分离胶 收 藕 Et期 ：2O0O一02—01，恬 回Et期 ：2O0O 07 02 基金项 目：国家 自然科 学基盒 资助项 目 f3970001I1 维普资讯 5期 葺点 ：番茄 ／番茄嫁接体发育过程 中的过氧化物酶 同工酶 34 (pH 88)。 样量 4O[JL。0～4cc稳流 电泳约 4．5h，预 电泳 电流 16mA，进 人 分离胶后加 大 到 30 一电泳后胶 板用联 苯胺染色法染色 。 蛋 白质含量测定采用考马斯亮蓝 c一250结合法一酶活性测定采用愈创术酚法 略加改 进 ．酶液 、醋酸缓 冲液和 愈创 木酚 的馄 台物 先置 30~C水浴 中反应 10min，再加 双 氧 水。 用 72l型分光光度计测定每分钟光密度变化量 (△OD)。重复测定 3次 ．以△OD-rain · mg protein表示酶 的 比活性 ： 石蜡切片 ：取嫁接接合 部．用含 7O％乙醇 的 FAA 固定液 固定 ，酒精系列脱水 ，二 甲 苯透明 ．石蜡包 埋 ，切 片厚度 8um．番 红 一固绿双 重 染色 ，加 拿 大树胶 封 固，光学 显微 镜 下观察并 照相 所