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不同等级枸杞中枸杞多糖含量测定及比较关键词　枸杞枸杞多糖含量测定 枸杞多糖是近年来从传统补益中药枸杞子(Lyci-umchinenseMill)中分离出的一种酸性杂多糖，其含量多少与枸杞疗效有较直接关系。因此枸杞多糖的研究已成为当前枸杞研究的热门课题，但大多是对其药理作用的研究，而对其提取工艺及应用新技术方面的研究少见报道。常见的商品枸杞品种较多，仅依赖其外观，颗粒大小，甜度来确定其内在质量缺乏科学的依据。所以，我们选择枸杞多糖来判断常见商品枸杞等级的内在质量，采用超声提取法提取枸杞多糖，苯酚一浓硫酸比色法对其含量进行测定。为临床及中药厂家用药选择提供参考依据。 1 实验材料、试剂及仪器 1.1 药材样品来源：产地见表1，药材购于浙江省宁波四明大药房。 1.2　试剂：苯酚、碳酸氢钠、铝片、石油醚(60～90℃)、乙醚、80％乙醇、95％乙醇、无水乙醇、丙酮、硫酸均为分析纯，标准溶液用葡萄糖为基准试剂。 1.3　仪器：T6新世纪紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)、SK8210LHC超声波仪(45KHZ上海科导)、HH-6电热数显恒温水浴锅(常州国华电器有限公司)、RE 2000旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)、BS224S电子分析天平(北京赛多利斯仪器有限公司)、DHG-9023A型电热恒温鼓风干燥箱(常州国华电器有限公司)。 2　实验方法与结果 2.1 苯酚试剂的制备：称取100g苯酚、0.05g碳酸氢钠和0.01g铝片，置圆底烧瓶中加热蒸馏，收集180℃的馏分。冷却后取馏分10g，加蒸馏水150ml溶解，置棕色瓶中保存。 2.2　标准曲线的制备：精密称取干燥恒重的葡萄糖0.1006g，配成100ml溶液，摇匀得到葡萄糖标准溶液，从中精密吸取0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00ml，分别加入6ml苯酚溶液和30ml浓硫酸，30℃恒温0.5h，冷水浴冷却至室温，定容至50ml，按分光光度法于490nm波长处测定吸光度。以不加样为空白对照，以葡萄糖浓度C(ug／m1)为横坐标，吸光度A为纵坐标，经线性回归处理得回归方程：A=0.0322x-0.0038，r=0.9989(n=6)，样品在2.00～20.00ug／m1的范围内线性良好 2.3　枸杞多糖的提取与精制：分别称取宁夏枸杞粉末特级、一级、二级、三级各100g，均用石油醚(60～90℃)500ml回流脱脂2次，每次1h。再用80％乙醇回流提取2次，每次2h；以除去单糖和低聚糖。将药渣加500ml水90℃水浴提取2次，合并2次提取液。旋转薄膜蒸发仪上减压浓缩至150ml，加少量活性炭脱色，过滤。滤液加5倍量95％乙醇，放置过夜，抽滤后的沉淀以100ml水溶解重复醇沉1次。沉淀以95％乙醇、无水乙醇、丙酮、乙醚多次洗涤，60℃干燥，即得枸杞多糖依次为35.73g、34.6lg、32.75g、31.48g。 2.4　精密度实验：精密吸取上述的葡萄糖标准溶液0.60ml，置于有塞试管中，照标准曲线的制备方法显色后。于490nm波长处测定吸光度A，求得RSD-0.83％(n=5)，可见本实验精密度较好。 2.5　稳定性试验：取枸杞多糖溶液按标准曲线的制备方法显色后，于490nm每隔30分钟测定1次吸光度A，连续4h考察其稳定性。结果显示：样品溶液在4h内吸光度基本保持不变，求得RSD=0.51％(n=5)，可知显色稳定可进行测定。 2.6 回收率试验：取宁夏枸杞特级，精密称取枸杞多糖粉末0.1017g，加入葡萄糖0.0182g，加80％的乙醇液50ml，45kHz超声提取2次，每次25min。过滤，滤渣加水50ml于45kHz超声提取20min，过滤，再加水50ml重复超声提取1次，合并2次提取液，然后定容于250ml容量瓶中，从中精密吸取10.00ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸光度，计算回收率。 2.7　含量测定：精密称取枸杞多糖粉末0.3025g，加80％的乙醇100ml，45kHz超声提取2次，每次25min。过滤，滤渣加水50ml于45kHz超声提取20min，过滤，再加水50ml重复超声提取1次，合并2次提取液，然后定容于250mi容量瓶中，从中精密吸取10.00ml，照标准曲线制备项下的方法测定吸光度，并计算多糖含量，得到结果如下。 3　讨论 由上述对枸杞多糖含量的测定结果来看，超声提取法可有效提高目标成分的得率，从而提高了药材的利用率。此外，超声提取法还能大大缩短提取时间，节约能源；用超声波提取1h比传统方法提取6h的提取率还要高；而且超声提取法不用加热，避免了高温对枸杞多糖结构的影响。与传统方法相比，超声提取法具有快速、高效的显