人参皂苷水相助溶方法探究.doc

人参皂苷水相助溶方法探究(1．岳阳职业技术学院，湖南岳阳414000；2．湖南师范大学，湖南长沙410081) 摘要：目的：寻找增加人参皂苷水相溶解度的方法。方法：在不同pH、温度、搅拌时间和使用潜溶剂的条件下，分别于水溶液中溶解人参茎叶皂苷和单体皂苷Rb1、Rg1、Re，分光光度法测定所试人参皂苷的溶解量。结果：在pH6.0～8.0范围内，人参茎叶总皂苷、Rb1、Rg1的溶解量随着pH的降低而增大；Re溶解量则在pH为7.0时最大。在5～35℃的范围内，人参皂苷溶解量均随着温度的增高而增加。搅拌时间在一定范围内延长，可通过加速助溶作用而提高人参皂苷的溶解量。乙醇或丙二醇对人参皂苷均有助溶作用，乙醇+丙二醇的助溶效果更好。二甲基亚砜除了能使单体皂苷Re的溶解量稍有增高外，反而使人参茎叶皂苷、Rb1、Rg1的溶解量降低。结论：在适当pH值、温度和搅拌条件下，使用乙醇和丙二醇是人参皂苷水相溶解的有效助溶方法。 关键词：人参皂苷；水溶液；助溶 中图分类号：R286.1　文献标识码：A 文章编号：1673-7717(2007)05-0954-03 人参皂苷(ginsenoside，GS)是人参的一类主要药效成份。至今，从人参和同源植物中分离出的人参皂苷单体约有60多种，已鉴定分子结构的绝大多数人参皂苷都属于甾体皂苷家族。不同人参皂苷单体的水相溶解度不一，有些单体很难溶于水。近年来已使用多种生物学技术深入研究人参皂苷的药理作用，细胞培养是其中的一种重要方法。人参皂苷在细胞培养体系中的溶解量无疑会影响其作用效果，但目前尚未见到如何使人参皂苷在水相中如何充分溶解的研究报道。本工作主要以几种水相溶解度不同的人参皂苷为代表被试物，寻找一定pH、温度、搅拌时间的条件下促进人参皂苷溶于细胞培养体系的适宜潜溶剂及其用量。 1主要试剂及仪器 紫外分光光度计(756MC型，上海分析仪器总厂)，电热恒温水浴锅(501型，上海医疗器械五厂)，快速混匀器(XK96－A型，江苏新康仪器厂)。人参皂苷Rb1、Rg1、Re(G－Rb1、－Rg1、-Re，纯度≥98％)和人参茎叶皂菅(gin-senoside of stem and leaf，GSL，纯度≥85％)标准品和样品：吉林大学基础医学部天然药物化学研究室提供；香草醛为天津化学试剂厂产品；冰醋酸和高氯酸为上海化学试剂一厂产品；无水乙醇(比重0.789-0.791)为湖南师范大学化学试剂厂产品；1，2一丙二醇(比重1.036～1.039)为天津BODI公司产品；二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide，DMSO，比重1.095～1.102)为天津科密欧产品。以上化学试剂均为分析纯。 2方法 2.1标准溶液的制备　精密称取G－Rb1、G-Rg1、G-Re和GSL各10mg，分别置10mL量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，制成1mg/mL标准溶液。 2.2标准曲线制定和回归方程计算　①精密吸取上述标准溶液各20、40、60、80、100μL，分别置10mL具塞试管中，蒸干；用无水乙醇设空白对照组。②取5％香草醛一冰醋酸溶液0.2mL，高氯酸0.8mL，混合加入各试管。③60℃水浴15min，取出后于冰水中迅速冷却15min，加入冰醋酸5.0mL，混匀；④用756MC型分光光度计在波长550nm处测定吸光度。每一标准溶液重复性测定5次，计算均值，绘制标准曲线，并计算出回归方程。 2.3样品水溶液制备和吸光度测定　①不同pH、温度和搅拌时间条件下的样品溶液配制：按上述标准溶液的制备方法，配制G－Kbl、G－Rg1、G－Re和GSL溶液，但用PBS作溶剂，分别控制配制条件，pH为6.0、6.5、7.0、7.5、8.0，温度为5、25、35℃，搅拌时间为0、10、20、30min。将以上各样品溶液转至离心管中，5000r/min离心10min，制取上清液。分别吸取各样品液的上清液100μL，置10mL具塞试管中，蒸干，同时设空白对照组；按“2.2”操作步骤②及其之后的方法操作，测定各上清液的吸光度。 ②加潜溶剂的样品溶液配制：称取G－Rbl、G－Rg1、G－Re和GSL各10mg，置10mL容量瓶中，分别加入无水乙醇0.2mL、1.2一丙二醇0.26mL、无水乙醇：丙二醇(1:1.3)混合液0.23mL、DMSO 0.25mL，溶解后用PBS稀释至刻度，控制温度=25℃，pH=7.0，搅拌时间=20min，配制成4种样品溶液，均含潜溶剂0.35 mmol/L。按以上所述方法，制取上清液并测定吸光度。 2.4样品水相溶解量的计算　将GS各样品水溶液上清的吸光值代入标准溶液回归公式，计算试样中的样品量，然后用下式计算出每100 mL试液中的所测样