提取仙人掌抑菌物质三种方法比较.docVIP

提取仙人掌抑菌物质三种方法比较摘要：目的比较3种实验室提取仙人掌抑菌物质方法的优缺点。方法以米邦塔食用仙人掌为原料，采用水浴浸提、超声波辅助提取、超临界提取3种方法提取其中的抑菌活性成分，并检测抑菌物质的抑菌性能。结果与结论超临界提取法得到的活性物质抑菌效果最佳，超声波辅助提取次之，水浴提取法效果最差。 关键词：仙人掌；抑菌活性物质；提取方法；超声波；超临界 中图分类号：R282.71文献标识码：A文章编号： 1672?979X(2009)07?0041?03 仙人掌别名仙巴掌，其性苦、凉，具有清热解毒、散瘀消肿、健胃、止痛、镇咳等功效[2]。国内仙人掌浸提液对多种供试菌抑菌实验的结果已有报道[3]，米邦塔仙人掌原汁对常见的细菌性皮肤病有良好的抑菌作用[4]，仙人掌提取液的抑菌效果[5]和抑菌机制[6]的初步研究结果也有报道。本实验对水浴浸提、超声波辅助提取、超临界提取3种方法提取所得米邦塔仙人掌中活性成分的抑菌效果做了比较。 1材料与仪器 1.1材料 新鲜米邦塔食用仙人掌(市售，新鲜，无霉烂)。取新鲜仙人掌10kg，去损伤，洗净切条后65℃烘箱烘干，粉碎，过50目筛备用。 乙醇、牛肉膏、蛋白胨、琼脂粉(生化级试剂)；氯化钠、蔗糖(A.R级)。 供试菌种：酵母菌(Saccharomycete)、大肠杆菌(Escherichiacoli)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacilluscereus)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、放线菌(Actinomycet)、毛霉菌(Mucor)。 培养基：牛肉膏蛋白胨培养基、马铃薯培养基自制。 1.2仪器 VC?130型超声波细胞破碎仪(Sonics公司)；RE52?98旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；FreeZone2.5L真空冷冻干燥机(Labconcog公司)；LRH?250A生化培养箱(广东医疗器械厂)；AIRTECH超净台(苏净集团安泰公司)；LS?B50L立式压力蒸汽灭菌器(上海华线医用核子仪器公司)；电热鼓风干燥器(上海实验仪器厂)；超临界液体(CO2)提取装置(杭州黎华泵业公司)。 2方法 2.1提取仙人掌抑菌物质 通常使用水浴浸提法。我们选取超声波辅助提取、超临界提取和水浴浸提3种方法的最佳提取条件，并比较所得活性物质的抑菌效果。 2.1.1水浴浸提考察浸提时间、料液比、温度、乙醇浓度4项因素后，获得最佳提取方案：处理后的仙人掌粉末20g，80％乙醇固液比1?20浸泡6h，70℃水浴回流1.5h，取滤渣再添加等量的80％乙醇回流提取，合并2次滤液。置4℃冰箱过夜沉淀多糖。4500r/min，10min离心，取上清60℃减压浓缩，真空冷冻干燥。 2.1.2超声波提取经单因素试验选择最佳参数：仙人掌粉末5g，80％乙醇1?20浸泡6h，超声波(频率70kHz，放射1s间歇1s)作用20min，过滤。取滤渣添加80％乙醇100mL，超声波放射。合并2次滤液，4℃冰箱过夜沉淀多糖。4500r/min，10min离心。取上清60℃减压浓缩，真空冷冻干燥。 2.1.3超临界提取每份取500g仙人掌粉，以50mL无水乙醇为夹带剂，流速10～13kg/h，条件设定见表1。 2.2提取物抑菌效果的检测 2.2.1培养基牛肉膏蛋白胨培养基培养细菌，马铃薯培养基培养霉菌。 2.2.2接种与培养[7]将供试菌种划线接种于灭菌的试管斜面培养基上，每菌种接3支试管。捆扎封口恒温恒湿培养1周，细菌培养温度35～37℃，真菌25～28℃，相对湿度75％。 2.2.3浸泡滤纸片80％乙醇稀释抑菌剂(相当于新鲜仙人掌含量1g/mL)，浸泡已灭菌的滤纸片(直径7.0mm)24h；80％乙醇浸泡的滤纸片作空白对照。 2.2.4抑菌实验无菌条件下将灭菌的培养基倒入培养皿中，每皿10～15mL。将培养的供试菌种制成菌悬液，各吸取0.2mL注入相应的培养皿中，使菌液分布均匀。将2.2.3中的滤纸片稍晾干后放入培养皿，每皿正三角形放置3片，与培养基完全接触。每份样品平行接种3个培养皿。培养箱培养，细菌培养温度37℃，真菌28℃，相对湿度75％。接种24h后开始观察，用游标卡尺量取抑菌圈的直径(mm)，求平均值。 3结果与讨论 3.1水浴浸提物的抑菌效果 见表2。水浴浸提法得样品对7种菌均有抑制作用，对酵母菌、大肠杆菌的抑制效果较佳。 3.2超声波提取物的抑菌效果 见表3。超声波提取物对酵母菌、大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌均有明显的抑制效果，抑制放线菌和毛霉菌的效果不