柑橘黄酮中总黄酮及橙皮苷含量测定.docVIP

柑橘黄酮中总黄酮及橙皮苷含量测定摘要：目的：建立柑橘黄酮中总黄酮及橙皮苷的含量测定方法。方法：采用分光光度法，以芦丁为对照品，测定总黄酮的含量，检测波长为500nm。采用高效液相色谱法测定橙皮苷的含量，色谱柱：Agilent ZORBAX c。(150ram x4.6mm,5um)；乙腈－0.1％磷酸(22：78)为流动相，检测波长为284nm，流速1ml／min。结果：分光光度法测定柑橘总黄酮在8.048－48.288mg／L(r=O.9999)的浓度范围内线性关系良好，加样回收率为101.9％。ItPLC法测定橙皮苷在0.01608－0.402g／L(r=1.0000)范围内线性关系良好，加样回收率为101.6％。结论：两种方法均准确、重现性好。适用于柑橘黄酮的质量控制。 关键词：柑橘黄酮；橙皮苷；紫外分光光度法；高效液相色谱法 中图分类号：R284 文献标识码：A　文章编号：1673－7717(2008)01－0044－02 柑橘是芸香科柑橘属植物的成熟果实，其干燥果皮是药材陈皮，具有理气健脾、燥湿化痰作用。柑橘在我国有非常丰富的资源，新鲜柑橘皮中含有丰富的黄酮类物质成分，药理学研究表明黄酮成分是其有效活性成分。具有抗炎、抗氧化、抗过敏作用以及降低血液和肝脏中胆固醇的作用。柑橘黄酮(Citrus Flavonoids，cf)中主要成分橙皮苷(hesperidin)属二氢黄酮苷化合物，具有防止心脑血管疾病的作用，临床上用于防治支气管炎。本文通过用分光光度法及HPLC法测定大孔树脂法提取的柑橘黄酮中总黄酮及橙皮苷的含量，为柑橘黄酮的质量控制提供实验依据。 1　材料与仪器 UV260紫外可见分光光度仪(日本Shimadzu)；LC－2010AHT(日本，$hlmadzu)；LC－Solution工作站；柑橘黄酮(citrus Flavonoids，cf)由金华贝康生物科技开发有限公司提供(大孔树脂吸附法提取)；芦丁对照品(中国药品生物制品鉴定所，0080－9705)；橙皮苷(hespeadin)对照品(中国药品生物制品鉴定所，110721－200512)；甲醇、乙腈为色谱纯，其它试剂均为分析纯。 2　方法与结果 2.1　总黄酮的含量测定 2.1.1　对照品溶液的制备称取在120℃干燥至恒重的芦丁对照品50.3mg，置25mL容量瓶中，加甲醇适量，振摇溶解后，定容至刻度，摇匀。精密量取10mL，置100mL量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得。 2.1.2标准曲线制备精密量取对照溶液1.0、2.O、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分别置25mL量瓶中，各加水至6mL，加5％亚硝酸钠溶液1mL，混匀，放置6min，加10％硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加氢氧化钠试液10mL(4.3g／100ral)，再加水至刻度，摇匀，放置15min，以相应试剂为空白，在500nm波长处测定吸光度，以吸光度A为纵坐标，浓度c为横坐标，绘制标准曲线。标准曲线方程为A=10.89534C－1.4×10，r=0.9999，在8.048－48.288mg／L的浓度范围内线性关系良好。 2.1.3　加样回收率试验称取cf细粉0.1052g置50mL量瓶中，加甲醇约25mL，超声3rain，加甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取2.0mL至25mL的容量瓶中，共9份，按低、中、高浓度分别加入2.1.1项下的对照品溶液2.0、2.5、3.0mL.按2.1.2项下自“加水至6mL起”同法处理。计算加样回收率，平均加样回收率为101.9％(n=6，RSD为0.4％)。 2.1.4　精密度试验取对照品溶液及样品溶液，于500nm处，以相应试剂为空白，测定吸收度A，每隔15rain测1次，连续测定1h，结果显示RSD为0.2％。表明显色后在1h内保持稳定。 2.1.5　柑橘黄酮中总黄酮含量的测定精密称取cf细粉0.1g，置50mL量瓶中，加甲醇约25mL，超声3mln，加甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取4.0mL至25mL的容量瓶中，按2.1.3项下处理，得到的cf样品液，于500nm处测定吸收度A，计算总黄酮含量，平均含量为12.3％(n=3，RSD为0.1％)。 2.2　橙皮苷的含量测定 2.2.1　色谱条件与系统适用性考察色谱柱：AglientZORBAX C zs(150ram×4.6mm，5um)；乙腈－0.1％磷酸(22：78)为流动相，检测波长为284nm，柱温35℃，流速lmL／min，进样量：10ul。橙皮苷与其它峰的分离度不得低于1.5。结果见图1。 2.2.2　标准曲线的制备　精密吸取浓度为0.804∥L的橙皮苷对照品贮备液1.0、2.0、5.0、12.5mL，