C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响.docVIP

　　C5位上羟基对染料木黄酮抑制重组人蛋白激酶CK2活性的影响 ：林小聪，刘新光，李春梅， 陈小文 【摘要】 目的 观察染料木黄酮C5位上的羟基对其抑制重组人蛋白激酶CK2全酶活性的影响。方法 将利用基因工程技术获得的重组人CK2α’及β亚基在体外等摩尔混合构成CK2全酶。通过测定药物作用后转移到CK2底物上的［γ32P］ATP的32P的放射性活度，探讨染料木黄酮和大豆甙元对重组人CK2全酶活性的抑制作用，并采用半数效量概率单位法 计算 其IC50值。结果 染料木黄酮和大豆甙元能明显抑制重组人CK2全酶活性，其IC50值分别是27.95 μmol/L和2.38 μmol/L，作用效果接近或者强于目前已知的CK2抑制剂N(2氨乙基)5氯萘1硫胺 (A3)。结构效应分析表明：C5位上的羟基可减弱染料木黄酮对重组人CK2全酶的抑制作用。结论 染料木黄酮和大豆甙元是两种有效的重组人CK2全酶的抑制剂。 【关键词】 蛋白激酶CK2；全酶；染料木黄酮；IC50 　　【Abstract】 Objective To observed the effects of 5 hydroxyl group of genistein on rebinant human protein kinase CK2 holoenzyme activity.Methods Rebinant human protein kinase CK2α’and β subunits ixed into reconstitute CK2 holoenzyme. the effects of 5 hydroxyl group of genistein on rebinant human protein kinase CK2 holoenzyme activity e activity in a concentrationdependent manner ol/L，respectively，ore potent than previously knoinoethy1)5chloronaphthalene1sulfonamide (A3). Structureactivity study indicated that hydroxyl group at position 5 is detrimental per se for the inhibitory effects of genistein on CK2.Conclusion Genistein and daidzein an protein kinase CK2 in vitro. 　　【Key e; genistein; IC50 　　蛋白激酶CK2 是一种高度保守的第二信使非依赖性丝/苏氨酸蛋白激酶。全酶是由两个催化亚基(α或α’) 和两个调节亚基(β)组成的不均一四聚体(α2β2，α’2β2 或αα’β2 )［1，2］。CK2的α和α’基因是原癌基因［3］。在多种实体瘤细胞和白血病细胞中，CK2活性比相应的正常组织中高3～8倍［4，5］。转基因小鼠淋巴细胞中的CK2α亚基的失控表达可导致淋巴瘤，CK2α亚基与原癌基因cMyc共表达或在p53表达被改变条件下，CK2α基因的表达可促进急性淋巴细胞性白血病的发生［2］。此外，CK2 与HIV1 的生命周期关系十分密切，它可在HIV1 的复制、转录及裂解细胞等功能的调控中起重要作用，一些CK2 抑制剂具有抗HIV1 活性［6］。Sarno等［7］指出，CK2在寻找抗肿瘤及抗病毒药物方面是一个具有吸引力的分子靶点，其特异性抑制剂具有潜在的临床应用价值。黄酮类化合物具有抗炎、抗病毒、抗氧化、利胆、强心、镇痛和抗肿瘤等多种生物学活性并与蛋白激酶关系密切；多种黄酮类化合物能抑制蛋白激酶的活性［8］。染料木黄酮和大豆甙元作为两种结构非常相似的黄酮类化合物（结构式见图1），它们可能会影响CK2的活性。因此我们选择染料木黄酮和大豆甙元作为研究的对象，在已克隆、表达和纯化人CK2α’及β亚基的基础上［9～11］，探讨其对重组人蛋白激酶CK2全酶的抑制作用，并观察C5位上的羟基对其抑制作用的影响，为进一步寻找新型的抗肿瘤和抗病毒药物奠定基础。 　　图1 染料木黄酮和大豆甙元的化学结构（略） 　　 　　材料与方法 　　1.材料和试剂 染料木黄酮和大豆甙元购自Aldrich公司；P81磷酸纤维素滤纸为ettlerToledo仪器上海有限公司产； LS6000SC型液闪计数仪为Beckman公司产；UV2100型分光光度计为尤尼柯上海仪器有限公司产。 　　3.克隆、表达和纯化人CK2α’和β亚基 人CK2α’和β亚基cDNA重组质粒pTCKA