cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞BGC823迁移的影响.docVIP

　　cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ对胃癌细胞BGC823迁移的影响 ：任峰, 高倩, 陶燕, 桑建荣, 杨小明, 范少华, 陈永昌 【摘要】 目的： 研究cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ(cGMP dependent protein kinase Ⅱ,PKG Ⅱ)对胃癌细胞株BGC823迁移活动的影响,并对其作用机制进行初步探讨。方法： 以携带PKG Ⅱ基因的腺病毒结构AdPKG Ⅱ感染胃癌BGC823细胞,用蛋白质印迹法及免疫荧光检测感染病毒后PKG Ⅱ的表达。用特异性PKG Ⅱ激活剂8pCPTcGMP作用感染病毒的细胞,通过Boyden 槽迁移率、刮除迁移分析法分析PKG Ⅱ高表达和活性增高对Ras同源性蛋白A(Ras homolog A, RhoA)激动剂溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导的胃癌细胞迁移的影响。结果： 胃癌细胞株BGC823 在感染AdPKG Ⅱ后高表达PKG Ⅱ,经cGMP类似物8pCPTcGMP 激活后,使RhoA活化诱导的细胞迁移活动受到明显抑制,与对照组比较差异有统计学意义(Plt;0.05)。结论： PKG Ⅱ能明显抑制胃癌细胞株BGC823的迁移。 【关键词】 cGMP依赖性蛋白激酶Ⅱ; 胃癌细胞; 细胞迁移 　　[Abstract] Objective: To investigate the effect of cGMP dependent protein kinase Ⅱ on the gastric cancer cell migration. Methods： An adenovirus encoding PKG Ⅱ gene munofluorescence microscopy. The cells olog A (RhoA) agonist lysophosphatidic acid (LPA) induced cell migration ined by Boyden scrapemigration assay and chamber migration assay. Results： The PKG Ⅱ expression in gastric cancer cell BGC823 igration(Plt;0.05, pared igration of human gastric cancer cells. 　　[Key igration 　　cGMP依赖性蛋白激酶(cGMP dependent protein kinase G,PKG)是广泛存在于真核细胞内的一类丝/苏氨酸蛋白激酶。现有的研究表明,PKG Ⅰ在某些肿瘤组织中的表达水平比正常组织明显降低,将外源PKG Ⅰ DNA转染细胞,则可抑制裸鼠模型中肿瘤细胞的生长和侵袭[1];PKG Ⅰ也有助于细胞的黏附链接,增加细胞的接触抑制,抑制血管的再生和肿瘤的生长[2,3]。这表明PKG Ⅰ具有一定的抗肿瘤作用[4],是一种新的肿瘤抑制因子[5]。对于PKG Ⅱ,已有资料显示其对细胞的增殖具有抑制作用[6],而我们最近又发现PKG Ⅱ在胃癌细胞中的表达明显降低[7],并且对胃癌细胞的增殖活动具有明显的抑制作用[8]。但是,PKG Ⅱ是否对胃癌细胞的迁移活动同样具有抑制作用,还未见明确报道。本研究旨在利用腺病毒表达载体,将PKG Ⅱ基因导入胃癌细胞,使其高表达,并以特异性PKG Ⅱ激活剂8pCPTcGMP作用感染细胞,激活PKG Ⅱ,观察活化的PKG Ⅱ对胃癌细胞迁移活动的影响。 　 　1 材料和方法 　　1.1 材 料 　　人胃癌细胞BGC823由上海细胞生物研究所提供;小牛血清购自兰州民海生物公司;DMEM购自 Gibco公司;PKGⅡ抗体购自Abgent公司;羊抗兔 IgG多克隆抗体购自中杉公司;8pCPTcGMP 购自 Calbiochem公司;Boyden迁移槽购自Costar公司;ECL购自Amersham Biosciences公司;携带LacZ和PKG Ⅱ基因的腺病毒载体由本实验室构建。其他试剂均为国产或进口分析纯。 　　1.2 细胞培养 　　人胃癌细胞株BGC823用含10%小牛血清的DMEM,置于37 ℃、5%CO2的孵育箱中培养。待细胞铺满瓶底后,用0.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA的混合消化液消化,传代培养。感染病毒前一天接种细胞,细胞密度调整为70%。 　　1.3 蛋白质印迹法检测PKG Ⅱ表达 　　将胃癌细胞BGC823接种到6孔板中,细胞密度为5×105/孔。携带PKG Ⅱ基因的重组腺病毒(AdPKG Ⅱ)分别按感染复数(multiplicity of infection,MOI)为0,50,100感染胃癌细胞BGC