CO2气腹压力和持续时间对人结肠癌细胞增殖的影响.docVIP

　　CO2气腹压力和持续时间对人结肠癌细胞增殖的影响 ：李旭，周西华，蔡景理，叶乐驰，陈荣，郑晨果 【摘要】 目的 ：研究CO2气腹压力和持续时间对人结肠癌STT法检测细胞增殖情况。结果：流式细胞仪检测细胞周期结果显示，CO2气腹压力对于人结肠癌G0/G1期细胞数值有显著影响(P lt;0.01)，对于S期、G2/M期细胞周期无影响。而不同CO2气腹持续作用时间对于各细胞周期无影响(P gt;0.05)， CO2气腹压力与作用时间对于各细胞周期不存在交互作用(P gt;0.05);　　MTT法结果显示CO2气腹下各组人结肠癌Sethods: S phase. CO2 pneumoperitoneum administered e had no significant influence on the cell cycle(P gt;0.05). There operitoneum pression and exposure time (P gt;0.05). After exposed to different CO2pneumoperitoneum pressure and exposure time (12～72 h)，the average absorbance values(490)of human colonic cancer STT assay o-peritoneum pressure and exposure time(P gt;0.05)for the proliferation viability of SSO)购于Sigma公司，小牛血清购于杭州四季青公司，RPMI 1640购于美国hyclone公司，碘化丙啶染液(PI)购于杭州联科公司，胰蛋白酶购于美国Gibco公司，MTT试剂盒购于南京凯基公司，细胞培养板购于德国Greiner公司，全自动气腹机购自德国MGB公司，流式细胞仪购于美国BD公司， 电子 PH计购于瑞士Mettler公司，680酶标仪购于美国伯乐公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 人结肠癌SI1640培养液中培养。置于37 ℃、5% CO2密闭细胞培养箱中，每2 d更换1次培养液。取对数生长期细胞用于实验。 　　1.2.2 体外气腹模型的建立：见图1。选45 cm×70 cm大小的塑料真空压缩袋(环氧乙烷熏　　蒸消毒)，袋内置一大小约25 cm×40 cm的平低塑料筐(消毒方法：紫外线照射半小时。作用：保持平衡，防止通气时压缩袋内培养板倾斜，培养液外流)，压缩袋气嘴口用橡皮塞封　　闭，用直径约1 cm的玻璃管自橡皮塞中间插入，玻璃管另一端通过胶皮管连接全自动气腹机。培养板或培养瓶放入真空压缩袋内的平底塑料筐内，袋口折叠2～3次，用宽透明胶带密闭后，用抽气筒抽尽袋内空气，然后打开全自动气腹机，调整到所需压力后通入99.5%医用CO2气体。 　　1.2.3 分组：气腹组共9组：CO2气腹压力分别设定为9、12和15 mmHg，作用时间分别为1、2、4 h，处理后放置在与对照组相同的环境中继续培养(气腹组分别以压力-时间表示为9 mmHg-1h，9 mmHg-2 h，9 mmHg-4 h，12 mmHg-1 h，12 mmHg-2 h，12 mmHg-4 h，15 mmHg-1 h，15 mmHg-2h，15 mmHg-4 h共9组)。对照组：直接放入37 ℃、5% CO2细胞培养箱中培养，培养时间同实验组。 　　1.2.4 流式细胞仪检测细胞周期变化：将处于对数生长期的人STT法检测细胞增殖活性 取单细胞悬液，调整细胞浓度为1.0 ×104/mL，接种于96孔培养板中，每组设6个复孔，每孔加入细胞悬液100μL(即每孔约含细胞1.0×103个)，置　　于37 ℃、5% CO2细胞培养箱中培养24 h待细胞贴壁后按1.2.3方法分组处理，处理后置入37　　℃、5% CO2细胞培养箱中培养，并分别于第12、24、36、48、60和72 h各取6个复孔，每孔　　加入50μL的MTT，继续培养4 h后，用2 mL注射器小心吸出培养液和MTT溶液，然后每孔再加入DMSO 150μL，振荡器微振荡10 min后，置于全自动酶标仪于490 nm处测定各孔吸光度值[D(490)]，取均值，绘制生长柱状图。 　　1.3 统计学处理方法 　　压力与时间两因素析因设计资料采用方差分析。 　 　2 结果 　　2.1 CO2气腹压力与作用时间对人结肠癌S期无影响，而CO2气腹持续作用时间对于各细胞周期无影响(P gt;0.05)，CO2气腹压力与作用时间无交互作用(P gt;0.05)。 　　2.2 CO2气腹压力与作用时间对人结肠癌STT试验分析气腹压力与作用时间对人结肠癌SW480细胞增殖的影响，发现