IFNγ对兔盆腔术中照射后直肠组织TGFβ1mRNA含量的影响.docVIP

　　IFNγ对兔盆腔术中照射后直肠组织TGFβ1mRNA含量的影响 ：张丽，王华，王娟，杨蕴一，刘孜 【摘要】 目的 探讨IFNγ对兔盆腔术中照射后直肠组织的病理变化和转化生长因子β1(TGFβ1)含量的影响。方法 54只雌性新西兰大白兔随机分成单纯照射组、药物干预组和空白对照组，盆腔术中照射后当天开始每隔4 d给予药物干预组肌注IFNγ 2.5×104u/(kg·f)，共5次;于照射后第4、8、12、16、20周每组分别处死5只兔，空白对照组于实验完成时统一处死，光镜下分别观察直肠组织的病理变化，原位杂交法检测TGFβ1mRNA的表达变化。结果 光镜下观察直肠组织病理改变及原位杂交TGFβ1mRNA含量，对比药物干预组与单纯照射组和空白对照组间均有显著性差异(Plt;0.05)。结论 IFNγ能明显抑制TGFβ1mRNA的表达，可减轻早期放射性炎症反应及后期放射性纤维化的程度。 【关键词】 术中照射;干扰素γ;转化生长因子β1;放射性直肠损伤 　　ABSTRACT: Objective To study the effect of interferonγ (IFNγ) on pathological changes and transforming groale Nely allocated into simple irradiation group, IFNγ treatment group and blank control group. IFNγ (2.5×104u/kg·f) ent group every four days after IORT for five times. Five rabbits ly sacrificed at 4, 8 12, 16 and 20 icroscope and the level of TGFβ1 mRNA expression icroscopy shoRNA expression of TGFβ1 in IFNγ treatment group at different time phases ple irradiation group and blank control group (Plt;0.05).Conclusion IFNγ can significantly inhibit the mRNA expression of TGFβ1, abate acute factitial proctitis and radiationinduced rectal fibrosis. 　　KEY evβ射线直视下单次大剂量照射，剂量为20Gy。照射完毕后关腹结束手术。空白对照组兔行相同手术，但不予照射。 　　1.4 术中照射设备 术中照射设备采用有机玻璃制作的盆腔φ4限光筒，其横截面为椭圆形，组织接触端为与盆腔组织良好吻合的曲面，照射野为耻骨联合上 　　4.0cm×4.0cm范围。 　　1.5 给药及观察方法 药物干预组于术后当天开始，以后每隔4d肌注IFNγ 2.5×104u/(kg·f)，共5次，单纯照射组和C组同期给予肌注5mL生理盐水。每日观察兔子活动、进食及排泄情况，每周称量体重。 　　1.6 标本采集及检测方法 单纯照射组与药物干预组于术中放疗后第4、8、12、16、20周分别随机处死5只兔子，取直肠组织分别进行以下操作：①石蜡包埋,切片行HE染色;②组织室温固定，石蜡包埋后制作4μm切片，原位杂交染色，细胞浆显棕黄色颗粒为阳性反应。空白对照组兔子于实验完成时处死、取材，进行相同的组织处理。 　　1.7 病 理学 的观察 参照SZAPIEL等[5]评价肺炎及肺纤维化的方法评价放射性直肠炎或纤维化的程度，并按照张东伟等[6]提供的 计算 肺损伤的病理半定量分析法进行直肠损伤病理半定量分析：无放射性直肠炎或纤维化(-，1分)，组织无充血水肿;轻度直肠炎或纤维化(+，2分)，组织稍有充血，水肿，增厚且阳性细胞表达率lt;20%;中度直肠炎或纤维化(，3分)，直肠组织充血水肿明显，表面有点状纤维化病灶且阳性细胞表达率在20%～50%之间;重度直肠炎或纤维化(，4分)，组织表面纤维化病变呈片状，增厚明显，色灰白且阳性细胞表达率gt;50%。 　　1.8 原位杂交结果的判断标准 采用双盲法观察切片，染色结果应用电脑图像采图软件NIKONSpot彩色病理图文分析系统进行图像采集，以图文分析软件IMAGEPro plus 5·0采集直肠组织原位杂交和免疫组化图像，将直肠组织各时点切片随机取染色区域5个高倍视野(×400)，测量并记录每个视野阳性染色的平均积分吸光度(IA)值。半定量积分法判断结果：①阳性细胞≤