IL10对TGFβ刺激成纤维细胞转化的影响.docVIP

　　IL10对TGFβ刺激成纤维细胞转化的影响 【摘要】 目的 探讨白介素10（interleukin10,IL10）对转化生长因子β（transtorm groyofibroblast,MFB)转化的影响。方法 培养人胚肺成纤维细胞，根据不同的处理方法分为五组：A组加入TGFβ (5 ng/ml)，B组加TGFβ (5 ng/ml)+IL10（5 ng/ml），C组加TGFβ (5 ng/ml)+IL10（15 ng/ml），D组加TGFβ (5 ng/ml)+IL10（25 ng/ml），E组为空白对照组（无细胞）。于72　h使用MTT方法观察各组成纤维细胞增殖情况，羟脯氨酸消化法检测胶原产生量，免疫细胞化学法检测平滑肌肌动蛋白（ αsmooth muscle actin,αSMA）的表达情况。结果 B、C、D组细胞内αSMA表达量分别与A组比较，差异均有统计学意义（P均＜0.01），D组与B、C组比较差异均有统计学意义（P均＜0.01）；羟脯氨酸产生量C与B组、D组比较差异均有统计学意义（P均＜0.01）。细胞增殖吸光度D组与C、B组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 在体外IL10对TGFβ刺激成纤维细胞的增殖、胶原产生及αSMA表达有抑制作用，且呈剂量依赖性。 【关键词】 白细胞介素10； 成纤维细胞；平滑肌肌动蛋白 【Abstract】 Objective To explore the effects of IL10 on TGFβ induced transdifferentiation of fibroblasts, multiplications and generation of collagen.Methods Human embryo lung fibroblasts ent. Group A:treated l, Group B:treated l and IL10 at the concentrations of 5 ng/ml, Group C:treated l and IL10 at the concentrations of 15 ng/ml,Group C:treat l and IL10 at the concentrations of 25 ng/ml,Group E:control group，culture dishes not containing fibroblasts.After 72 hour, MTT evaluated the situation of cell multiplication, hydroxyproline digestion examination detected the collagen generation and αSMA expression examinated by immunocytochemistry.Results The αSMA expression of fibroblasts in group B,group C,group D ultiplication of group C ultiplication,collagen formation and αSMA expression of fibroblast stimulated by TGFβ in vitro, its inhibitory effect depends on concentration. 【Key ooth muscle actin 肺纤维化为弥漫性肺间质性疾病的共同结局，细胞外基质（extracellular matrix,ECM）过度生成及异常沉积是其共同的病理学特征。成纤维细胞特别是其分化所成的以胞浆内含有平滑肌肌动蛋白（αsmooth muscle actin,αSMA）为特征的肌成纤维细胞(myofibroblast,MFB)，可持续分泌大量ECM ［1］。TGFβ(transtorm grol浓度，每孔取200 μl加入96孔板中，纵向取5组（每组12孔）。A组：加入TGFβ (5 ng/ml)；B组加TGFβ (5 ng/ml)+IL10（5 ng/ml）；C组加TGFβ (5 ng/ml)+IL10（15 ng/ml）；D组加TGFβ (5 ng/ml)+IL10（25 ng/ml）；E组：空白对照组（孔板内无细胞）［3］。干预前换无血清培养基培养细胞12 h，使细胞处于静止状态。于加入试剂后72 h取出96孔板，每孔加入20 μl MTT（5 ng/ml，用无血清RPMI 1640配制，过滤除菌），继续培养4 h。吸去培养液，加入0.2 ml