人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠pJNK表达的影响.docVIP

　　人参皂甙Rg1对脑缺血再灌注大鼠pJNK表达的影响 【关键词】 人参皂甙Rg1 脑缺血再灌注 pJNK 大鼠 　　Abstract: Objective To discuss the effects of Ginsenoside Rg1 on the expressions of JNK in the rats brain tissue after focal cerebral ischemia-reperfusion and its significance. Methods Rats -operative group, Model group, Ginsenoside Rg1 groups of 10 mg/kg, 20 mg/kg, 40mg/kg, and Nimodipine group of 1 mg/kg at random. The method of middle cerebral artery occlusion (MCAO) in rats odel of cerebral ischemia-reperfusion, and then the expressions of JNK after cerebral ischemia-reperfusion 6 h ical method in immunity tissue. Results The positive rate of expression of rats brain tissue in each of the Ginsenoside Rg1 groups is (23.89±6.77), (15.19±4.59), (9.15±4.77) respectively. Conclusions The results shoechanism of Ginsenoside Rg1 to protect the brain cells from damage after cerebral ischemia-reperfusion injury may be associated ore effective ia-reperfusion; JNK；rat 　　研究表明，人参皂甙Rg1能通过抑制细胞凋亡对脑缺血再灌注损伤发挥保护作用，但其抗凋亡的机制还不十分清楚［1］。丝裂原蛋白激酶信号通路(mitogen activated protein kinases，MAPKs)是脑缺血再灌注损伤中主要的信号通路，它包括5个亚家族，其中c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinases，JNKs)亚家族主要参与细胞凋亡的调控。本实验拟采用免疫组织化学方法检测脑缺血再灌注后大鼠海马CA1区神经元pJNK的表达，并观察人参皂甙Rg1对pJNK蛋白表达的影响，以明确人参皂甙Rg1是否通过JNK信号通路来抑制脑缺血再灌注后的神经元凋亡。 　　 1 材料与方法 　　1.1 实验动物分组与给药方法 　　Sprage-Dag/kg）；尼莫地平药物对照组（1 mg/kg）；每组5只大鼠。③～⑥组分别于术前5 d至取材当日腹腔注射人参皂甙Rg1、尼莫地平，其余各组分别注射等量等渗生理盐水，1 次/d。 　　1.2 药品及试剂 　　人参皂甙Rg1(纯度gt;95%)购自吉林大学有机化学教研室；尼莫地平注射液(批号为071001)，购自山西亚宝药业；其它药品均为国产分析纯，由辽宁医学院 科学 实验中心提供。 　　1.3 大鼠右侧局灶性脑缺血(MCAO)模型的制备 　　10%水合氯醛(350 mg/kg)腹腔麻醉，采用改良线栓法［2］制备大鼠局灶性脑缺血模型。线栓采用头端光滑烫圆的直径0.23 mm鱼线，长度由右侧颈外动脉分叉部计约（18.5±0.5）mm。栓塞2 h后，将鱼线轻轻拔出并缝合皮下筋膜及皮肤，即为再灌注模型，再灌注时间为4 h。 　　1.4 免疫组织化学染色及图像分析 　　MCAO术后6 h，将各组大鼠麻醉，4% 多聚甲醛灌流固定，断头取脑，梯度酒精脱水，定向石蜡包埋切片，厚5 μm。切片常规脱蜡至水，免疫组化Envision法染色：3% 过氧化氢溶液处理15 min以去除内源性过氧化物酶；然后采用pH6.0 枸椽酸缓冲液高压修复抗原， 自然 冷却至室温后；滴加1∶200 稀释的pJNK单克隆抗体4 ℃孵育过夜；然后滴加辣根酶标记羊抗兔多聚体（PV6001）37 ℃孵育30 min。每步骤之间用0.01 M PBS洗3 次，每次5 min。DAB显色，苏木素复染，脱水，透明，中性树胶封片，光学显微镜下观察。阴性对照用PBS替代一抗［2］。pJNK蛋白阳性定位于神经元的细胞核，呈棕黄色。 　　采用CIAS-100