右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡的影响.docVIP

　　右归丸对骨髓抑制小鼠骨髓细胞周期和凋亡的影响 ：郑轶峰，姜建青， 张力华，石娅萍，黄茜 【摘要】 　　目的 观察右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓细胞周期和凋亡的影响, 探讨其可能造血调控作用机制。方法 用全自动血细胞分析仪、白细胞计数法和流式细胞术(FCM )分别检测右归丸对骨髓抑制小鼠外周血、骨髓有核细胞数以及骨髓细胞周期和调亡的影响。结果 右归丸中、高剂量均能明显升高外周血红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、骨髓有核细胞(BMC) 数，右归丸高剂量对血小板(PLT)和白细胞( 期细胞的转化, 从而导致G2/M 期细胞比例明显升高, 增殖指数(PI)也明显升高。中、低剂量组右归丸的骨髓细胞凋亡比例显著下降。结论 右归丸可能通过促进骨髓细胞修复受损的DNA，加速通过G1/ S和S期监测点，进行增殖和分化；抑制造血细胞的凋亡；调节造血细胞增殖与凋亡之间的平衡等机制，从而促进损伤骨髓造血功能恢复。 【关键词】 右归丸 骨髓抑制 骨髓细胞 细胞周期 凋亡 　　Abstract Objective To study the effect of You Gui ethods Automatic blood cell analysator, etry (FCM) arroarroyelosuppressed mice.Results Peripheral red blood cells, hemoglobin and bone marroiddle or high dose You Gui phase, thus led to a higher cell proportion in G2/M phase as iddle or loarroay promote the recovery of hemopoietic function of injured bone marroaged DNA and it can accelerate GO/G-S phase and S-G2/M phase transition, activate the proliferation and differentiation, inhibit the apoptosis of hemopoietic cells and regulate the balance betyelosuppression bone marroa 公司产品) ；60Co γ射线放射源(四川省肿瘤 医院 放疗科提供)；全自动血细胞分析仪BC-3000 Plus型（深圳迈瑞生物医疗 电子 股份有限公司）；流式细胞仪(EPICS XL型, Beckman-Coulter 公司)。 　　1.2 方法 　　1.2.1 骨髓抑制动物模型的制备 参照严苏纯等(4)的方法造模。小鼠经2.0 Gy 60Co 照射后的第4d 开始，每天腹腔注射环磷酰胺(CTX) 50 mg/kg (于临用前配制)，连续给药3 d 完成模型制备。 　　1.2.2 动物分组与给药 将小鼠随机分为正常对照组、模型组、右归丸低剂量组、中剂量组、高剂量组和阳性对照组，每组8 只。除正常对照组外, 其它5组均进行造模。小鼠造模完成的第2 d 开始给药, 正常对照组和模型组每只灌胃0. 2 ml/ 10 g/d 的生理盐水；低剂量、中剂量和高剂量右归丸组分别给右归丸2.25 g / k g 、4.5 g / kg和9.0 g / kg, 每只小鼠灌胃0. 2 ml/ 10 g /d, 阳性对照组每日腹腔注射重组人粒细胞集落刺激因子（G－CSF）150ug/kg，共给药7 d。 　　1.2.3 外周血细胞计数 最后一次给药后24 h，经小鼠眼球后静脉丛采血0.1 ml，用BC-3000 Plus 型全自动血细胞分析仪进行血常规检测。 　　1.2.4 骨髓有核细胞悬液的制备 最后一次给药后24 h, 以颈椎脱臼法处死各组小鼠, 取出股骨, 剔除肌肉和结缔组织, 剪开股骨两端, 用6 号针头以生理盐水液冲出骨髓细胞, 再用4 号针头过滤制成单个骨髓细胞悬液。取部分骨髓细胞悬液在显微镜下按白细胞计数法进行骨髓有核细胞计数。 　　1.2.5 细胞周期样品制备 将上述单个骨髓细胞悬液离心(1000 r/m in, 5 m in)，弃上清，用PBS 洗涤两次，去上清液，滴入70% 冷乙醇固定细胞， 立即混匀，用封口膜封口，放置4 ℃冰箱冷藏备用。 　　1.2.6 细胞周期分析 和凋亡细胞测定　取上述70% 冷乙醇固定的细胞样品, 用PBS 洗两次, 以洗去残留的乙醇, 加100 μl PBS 后混匀, 加碘化丙锭染液1ml染色30分钟(4℃, 避光30min),上流式细胞仪检测细胞周期的变化和凋亡细胞的比例。结果以细胞周期各