哇巴因对大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响.docVIP

　　哇巴因对大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响 ：张玉蓉，袁祖贻，任延平 【摘要】 目的 观察哇巴因对大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性及多巴胺D1受体mRNA表达的影响。方法 28只SD大鼠随机分为2组，即哇巴因组[27.8μg/(kg·d)哇巴因腹腔注射]和对照组(生理盐水1mL/d腹腔注射)，每周测量鼠尾动脉血压，共5周。于第3、5周后分2批处死动物，应用分光光度法测定各组大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性，同时采用实时定量PCR(realtime PCR)观察肾皮质中多巴胺D1受体mRNA表达的变化。结果 大鼠腹腔注射哇巴因3周后，两组血压无显著性差异，但哇巴因组大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性高于对照组(Plt;0.01)，多巴胺D1受体mRNA表达低于对照组(Plt;0.01)。5周后，哇巴因组大鼠血压与对照组相比有显著性差异(Plt;0.01)，哇巴因组大鼠肾皮质Na+K+ATP酶活性进一步增高(Plt;0.01)，多巴胺D1受体mRNA表达进一步减低(Plt;0.01)。结论 长期小剂量外周注射哇巴因可使SD大鼠血压持续升高，这一作用与肾近曲小管Na+K+ATP酶活性增加引起水钠潴留有关，多巴胺D1受体可能参与了这一过程。 【关键词】 Na+K+ATP酶活性;多巴胺D1受体;哇巴因;高血压;钠转运 　　Medical School of Xian Jiaotong University, Xian 710061, China)ABSTRACT: Objective To study the effects of chronic ouabain treatment on Na+K+ATPase activity and the expression of dopamine D1 receptor in rat kidney cortex. Methods A total of 28 male SpragueDaly divided into ouabain group and control group, ine D1 receptor in rat kidney cortex easured by colorimetric assay and realtime PCR, respectively. Results After 3 ent, the mean SBP did not change significantly, but the Na+K+ATPase activity increased (Plt;0.01) and the expression of dopamine D1 receptor decreased (Plt;0.01) in parison ean SBP ine D1 receptor further decreased (Plt;0.01). Conclusion Chronic peripheral administration of loay be related to the increased renal sodium retention induced by the increased renal cortical Na+K+ATPase activity. Dopamine D1 receptor might be involved in this process. 　　KEY V逆转录酶(PROMEGA)合成cDNA，以cDNA作为realtime PCR的模板。所有的实验重复3次。realtime PCR在ABI PRISM 7500 PCR仪(Applied Biosystems, UK)上进行，采用ABI公司的SYBR Green Realtime PCR Master Mix，进行realtime PCR。为确定模板的质量和引物的特异性，在检测样本之前先测定每个模板与其所对应引物的熔解曲线，确保该曲线只有一个峰，且反应产物中只出现1个特异的预期DNA条带。每个样本分别扩增目的基因和内参照基因，并分别设2个复孔。引物如下D1受体：正向引物5′TCTCCTTTCGCATCCTCACG3′;反向引物5′GCCGCACAGACAAGGGTATT3′;GAPDH(看家基因，体系内参照)序列：正向引物5′ACGGGAAACCCATCACCATC3′，反向引物：5′CGCCAGTAGACTCCACGACAT3′。上述引物均由上海生工生物工程公司设计合成。反应体系：SYBR Green Realtime PCR Mix 12.5μL，cDNA 1.5μ