活化抗原提呈细胞对人骨肉瘤PL┐11细胞凋亡后体外免疫原性的影响.docVIP

　　活化抗原提呈细胞对人骨肉瘤PL┐11细胞凋亡后体外免疫原性的影响 　　摘要:目的研究人骨肉瘤细胞PL-11被诱发凋亡后，体外活化的抗原提呈细胞（APC）对其免疫原性的影响.方法①H2O2诱发PL-11凋亡的浓度和时间筛选，流式细胞仪分析.②正常献血者粗分白细胞悬液离心沉降法得人外周血单个核细胞，粘附法分离单核细胞并预激活，同时分离得混合淋巴细胞并预培养.激活单核细胞分别与凋亡细胞多次冻溶物（PL-11a）和未发生凋亡之PL-11的多次冻溶物（PL-11u）和淋巴细胞孵育7d（pl-11a组及pl-11u组），另设单纯淋巴细胞与凋亡PL-11多次冻溶物培养组（对照组）和激活单核细胞与淋巴细胞共培养（MON组）组，计数法测量增殖.③各组培养的淋巴细胞进行体外杀伤实验（效靶比100∶1），改良MTT（thiazolylblue）法测量杀伤及抑制率.结果①低于100nmol#12539;L-1H2O2在7h之内均无明显诱导凋亡作用，于14h后均诱导凋亡，且存在量效差别，100nmol#12539;L-1处理36h最明显.②PL-11a组淋巴细胞体外增殖显著，PL-11u组仅有较弱的增殖作用，对照组和MON组均无明显增殖作用.③pl-11u组仅有较弱的淋巴细胞杀伤作用，pl-11a组则有明显的增强，而对照组及MON组均无作用.结论人骨肉瘤细胞在H2O2诱发凋亡后，如经活化APC吞噬，可显著提高其体外免疫原性而引出肿瘤杀伤效力，提示外周血中活化单核细胞处理凋亡骨肉瘤细胞将可能成为个体化的骨肿瘤疫苗方案. 　　Keyonocytes;apoptosis;osteosara 　　Abstract:AIMTostudytheinfluenceofactivedantigenpresentingcells（APC）ontheinvitroimmunogenicityofapoptotichumanosteosaraPL-11.METHODS①ToselectH2O2concentrationandetoinducedapop-tosis，floeter（FCM）pliedtoanalyse②Pe-ripherybloodmononuclearcells（PBMC）rurallyseperatedonocytespho-cytesandactivatedmonocytesfor7days（pl-11agroupandpl-11ugroup）respectively.Lymphocytesphocytesonoctyes（MONgroup）phocytesfromeachgroupeasurethekillingabilityinvitrobymodifiedMTT（thiazolylblue）method.RESULTS①H2O2ol#12539;L-1concentrationorlessorin7h，butcouldinduceapoptosisafter14h，especiallythe100nmol#12539;L-1after36h.②LymphocytesofthePL-11agroupincreasedsignificently，erelyandthecontrolgroupandMONgrouphavenoincrease.③Thepl-11ugroupshoanosteosaracellscouldincreaseimmunogenicityinvitrothroughtheactivatedPBMCmono-cytes，thisindicatesthattheactivatedmonocytesphagocy-tosedrepeatedfreeze-thaanosteosaraor-vaccine. 　　0引言 　　随着现代肿瘤免疫学的发展，生物治疗已成为日益受人关注的第四种治疗常规.目前研究和应用简便而有效的免疫疫苗已经成为肿瘤免疫治疗学中的的研究热点.Herry等［1］报道了活化抗原提呈细胞APC吞噬凋亡肿瘤细胞后可成为有效的肿瘤疫苗，并报道可以引出记忆性的CTL作用.现已证明凋亡细胞可以表达有效地为免疫系统识别的抗原［2］.本研究依据该原理分析如果将人骨肉瘤诱导凋亡并经活化的APC细胞处理，可提高肉瘤免疫原性并诱导出杀瘤能力. 　　1材料和方法 　　1.1材料 　　PL-11人骨肉瘤细胞系，西京医院全军骨科研究所自建.正常献血者粗分白细胞悬液，西京医院输血中心提供.PMA（phorbel12-myristate13-acetate）Sigma公司，rhIL-2PBH生物公司.单核细胞培养基（MC）含300mL#12539;L-1标准胎牛血清和IL-2及PMA培养基8mL/10mL;肌条件培