甲基强的松龙对成骨细胞钙通道电流的影响.docVIP

　　甲基强的松龙对成骨细胞钙通道电流的影响 ：贾丙申，陈燕平，高云，张文杰， 薛延 【摘要】 　　目的：观察甲基强的松龙（mPSL）对MC3T3E1成骨细胞L钙通道电流（Ltype voltagesensitive calcium channels current，LVSCCsC）的影响。方法:设A组（正常对照组）、B组（106mol/L）、C组（105mol/L）和D组（104mol/L），各浓度的mPSL作用24h后，膜片钳技术记录每组细胞的LVSCCsC（nA）。结果：正常对照组峰值电流为（-0.2284±0.0209，nA）；106mol/L 组为（-0.1991±0.0158, nA）下降12.8%； 105mol/L和104mol/L组分别为（-0.1839±0.0179，nA）、（-0.1610±0.0033，nA）分别下降19.5%和29.5%,与正常对照组比较有显著性差异（Plt;0.01）。 结论：mPSL剂量依赖性抑制成骨细胞LVSCCsC。 【关键词】 膜片钳技术；钙通道电流；甲基强的松龙；成骨细胞 ［ABSTRACT］ Objective: To observe the influence of methylprednisolone on the Ca2+ channel currents in osteoblasts. Methods： All ol/L)、C(105mol/L) and D(104mol/L).The p technique channels current(LVSCCsC). Results: The mean peak current of control group channels dosedependently. 　　［KEY ethylprednisolone; Osteoblast 甲基强的松龙（methylprednisolone，mPSL）是一种人工合成糖皮质激素，具有强力抗炎作用、免疫抑制作用及抗过敏作用［1］,其对成骨细胞呈双向作用，生理浓度促进成骨细胞分化；超生理浓度长期使用可抑制成骨细胞分化、增殖,使成熟的、具有功能的成骨细胞数目减少［2］。大量研究表明兴奋性细胞的钙通道电流与细胞功能有着密切的联系,但是成骨细胞钙通道电流的研究鲜见报道。本实验运用膜片钳技术观察mPSL对成骨细胞LVSCCsC的影响。 　 　1 材料与方法 　　1.1 试验细胞 　　成骨细胞（MC3T3E1细胞株，购于协和细胞中心）传代培养。原代成骨细胞用0.125％的胰蛋白酶，37℃水浴消化5min，收集细胞悬液，1000r/min离心10min，弃上清，传于培养皿中，用含20％胎牛血清的IMDM培养，置于CO2孵箱。实验温度(22±2)℃。培养48h后备用，每株传2～4代。实验时用浴液完全置换培养基。 　　1.2 mPSL的配制和组别设计 　　mPSL（批号Pharmacia NV/SA生产，40mg/瓶），溶解后，取12.5μL原液，加入细胞浴液112.5μL，标记A液；取12.5μL原液，加细胞浴液1237.5μL，标记B液；取12.5μL原液加细胞浴液12487.5μL，标记C液。从备用液体A、B和C中分别取12.5μL，置于终末液体体积为1mL的培养皿中，mPSL的浓度为104mol/L、105mol/L和106mol/L。传代后的细胞分为4组，正常对照组、104mol/L组、105mol/L组和106mol/L组，每组记录10个成骨细胞钙离子电流。除正常组外，各组依次（每个皿）给予A、B和C液12.5μL，作用24h后进行膜片钳实验。 　　1.3 钙通道记录细胞浴液及电极液（单位均为mmol/L）［3］ 细胞浴液：NmethylDglucamine(NMDG+) 110， BaCl2·2H2O20，HEPES10，glucose10，pH=7.4 (NMDG+缓冲)。电极液：NMDG+100，HEPES150， EGTA20，CaCl2·2H2O， MgCl2·6H2O，pH=7.4(KCl缓冲)。 　　1.4 全细胞记录模式纪录Ca2+离子电流 电极由硬质玻璃毛胚（内径1.6mm，壁厚0.2mm）经二次拉制而成，充以电极内液后阻抗1～4MΩ。用微电极操纵器将电极缓慢推向细胞，负压吸引形成高阻封接后吸破电极尖端上的细胞膜形成全细胞记录模式，然后补偿膜极电容和串联电阻。电压钳制脉冲和数据采集由Pclamp软件（美国Axon Instrument，6.02）控制，刺激信号经D/A转换器（1200 A/D、D/A，AXON.INC，美国）和膜片钳放大器（Axonpatch