淀粉酶检测.PPT

Outline Feature of saliva and salivary stain Objective requirement Confirmatory test Individual identification High levels of amylase in the saliva. Can be found in other body fluids saliva: 263 000-376 000 U/L Urine: 263-940 U/L Blood: 110 U/L Semen:35 U/L Nasal secretion: undetectable levels Sweat: undetectable levels 灵敏、特异，羊、马、牛、猪、猫、狗等动物唾液（斑）检测结果为阴性，尿液、血液、精液、汗液、鼻腔分泌物等反应不敏感 干扰：粪便污染（淀粉酶含量与唾液接近） 抗血清的标化 效价：产生明显凝集反应的最大抗血清稀释倍数 标化抗血清 按照最大抗血清稀释倍数稀释抗血清原液 某市多家单位发生盗窃。犯罪嫌疑人作案时均戴手套作案，无法取到有价值的指掌纹，虽然作案手法相似，但无并案依据。现场勘验时发现在多个案发现场提取的烟头或嫌疑人在现场喝过水的纸杯。 问题：如何正确提取烟蒂及水杯以尽量避免唾液斑的污染和损失？盗窃案中生物样本的意义？ 某年某月某日，某市某一居民小区发生入室抢劫案，勘验现场时发现卧室地上一口香糖胶，系嫌疑人所留。 问题：如何进行口香糖类检材的提取？如何处理口香糖以获取尽可能多的脱落细胞？ * Identification of Salivary stain Nie Shengjie, Assoc.Prof Section of Forensic Biology 2010.09.20 Feature of saliva and salivary stain Salivary glands Saliva secretion 唾液的分泌 Saliva composition 唾液成分 正常纯净唾液：无色无味接近中性液体,低渗 通常情况为泡沫状、稍混浊粘稠液体 正常分泌量：成人每日1.0~1.5L 分泌量及性质受精神因素、刺激强度等影响 Physical Chemical Properties 唾液的理化性质 ①唾液 清水漱口 自然流出 试管/唾液斑/灭活酶 ②口腔拭子 棉签/纱布浸湿 反复擦拭口腔粘膜 无创，简便，对照样本 Collect of saliva 新鲜唾液收集 什么情况会留下唾液斑？ 唾液斑提取: 整件提取/二步转移 性侵犯案皮肤咬痕、舔舐痕提取 Objective requirement 检验目的与要求 Is it salivary stain? Is it human salivary stain or animal salivary stain? Individualize of salivary stain Confirmation of Salivary Stain 唾液斑的证明 检出 淀粉酶 口腔脱落上皮细胞 确证唾液斑 Detection of amylase 淀粉酶检测 Amylase enzyme can break down starch (淀粉) Two kinds of test: Starch-iodine assay 淀粉碘实验 Phadebas Reagent Phadebas 试剂 Detection of amylase 淀粉酶检测 Starch-Iodine Test 淀粉碘实验 principle Iodine + starch→ turn blue Amylase breaks down starch 淀 粉 酶 检 测 starch 37℃ Iodine 阴性 蓝色 无淀粉酶/失活 阳性： 无色/淡黄色 有淀粉酶 设置已知阳性和阴性对照！ 假阳性 假阴性 生成糖的证明 淀粉碘 阳性 反应液 碱性铜 氯化三苯基四氮唑液 短时加热 阳性 红色沉淀 阴性 无色/浅红色 阴性 无沉淀 阳性 红色沉淀 Starch-Iodine Test 淀粉碘实验 Gel diffuse 凝胶法: Gel containing starch is stained blue with iodine Sample is added to well i