二维凝胶电泳新技术与其应用.pdfVIP

·62· 文章编号：1007一S．56S(200S)01—0062—04 ·综述· 二维凝胶电泳的新技术及其应用 宋革，姜勇 中国分类号：Q51 文献标识码：A 1975年，O’FarmU以及Kkee等人发明了双向凝 性蛋白质的情况。并且，如果想按照实验目的从2一 胶电泳(two—dimensionalgel DE凝胶的蛋白质印迹中找到感兴趣的目标蛋白，需 electrophoresis，2一DE)， 根据样品中蛋白质的两个重要理化特性：等电点(i争 要跑一个2一DE找出样本中大多数蛋白，包括溶解 oelcctric points，P1)和分子量(molecular度很低的蛋白。基于此目的，出现了宽范围的IPG胶 weight，MW)， 将样品中的蛋白质进行分离。其原理是第一向基于 条，如pH 6—12，甚至更宽范围 3一lO，pH4—7，pH 6—12 蛋白质PI不同用等电聚焦(isodectricfocusing。mF)分达到pS3—12。与pH3—12的胶条相比，pH 离，第二向则按MW的不同用聚丙烯酰胺十二烷基 3—12 的胶条提高了碱性蛋白质的摄取，原因是pH 硫酸钠凝胶电泳(sodium 的胶条降低了反向电内渗…。 dodecylsulfate-polyacrylamide sel 虽然标准18cm长的双向电泳胶条一般能够分 elecm’phoresis，SDS—PAGE)分离，把复杂蛋白混 合物中的蛋白质在二维平面上分开。其后的25年 辨显示2000个蛋白斑点，但还不能分辨给定蛋白质 中，2一DE经过了多方面的改进，而且相应蛋白鉴定 混合物样本中的所有蛋白质，尤其是不能很好地分 技术也得到了发展，这使得2一DE广泛应用于蛋白 辨出蛋白质翻译后的修饰变化。可通过将胶条分离 距离从18cm延至40cm，使得到蛋白质分辨数量的 质组学(proteomics)领域，成为研究“结构蛋白质组” 与“功能蛋白质组”的最有使用价值的方法，在蛋白 增多。目前，世界上单张胶上分辨蛋白斑点最多的凝 质组研究中有着不可或缺的地位。现对2一DE近期 胶是通过使用不同的缓冲液体系预分蛋白质，并用面 的进展及其应用作一综述。 积较大的双向凝胶，共分辨27752个蛋白质斑点…。 1 2一DE技术的新近进展 1．3窄pH范围缩放胶条的发明应用 1．1固相pH梯度胶条 3．5—6．7 1982年BjeUqvist等开始采用固相pH梯度胶将数个窄pH范围胶条重叠拼接形成pH (innnobilizedpHgradients，ⅡB)，在此之前双向电泳使范围内的大胶，大大增加了酵母蛋白质斑点的总数， 用两性电解质pH梯度柱型胶，这种方法形成的一 向pH梯度有其固有的变化性，因此很难控制大量 范围的2一DE凝胶中似乎得到良好分辨的点很可能 凝胶的重复性“1。而由凝胶固定在支持膜上制成的 常常是两个或更多点的融合，而在窄pH范围凝胶中 眦胶条的出现解决了这一问题，该技术快速、具有 分离开来…，后续的质谱鉴定充分证实这一观点…。 较好的重复性阱。