营养盐（氮铁NaCl）对雨生红球藻生长和虾青素积累的影响-海洋科学.DOC

几种胁迫方式对雨生红球藻积累虾青素影响的初步研究 黄水英，齐安翔，李 哲李晓梦，王 蕴蔡明刚厦门大学海洋与环境学院厦门361005） 虾青素astaxanthin）是一种近年来进入国际研发领域的红色类胡萝卜素，广泛存在于自然界，尤其是海洋生物体内，其抗氧化能力比其他类胡萝卜素强10倍，比维生素E强550倍，被誉为超级维生素E。虾青素的着色能力显著，并具有抗癌症、抗衰老、增强免疫力等一系列重要的生理功能，鉴于此，它被广泛应用于保健品、医药、水产养殖等领域，具有广阔的发展前景。在虾青素的生物来源中，雨生红球藻Haematococcus pluvialis）中虾青素可占其干重的13%，且体内虾青素及其酯类的结构配比与养殖对象所需一致，因此被公认为自然界中虾青素的最佳来源蔡明刚等2003）。雨生红球藻是一种淡水单细胞绿藻，生活史呈现多样性：在适宜环境下，以游动的绿色营养细胞形态存在；在不利环境下，以不动的厚壁孢子形态存在，并因大量积累虾青素而呈现红色。相应地，当前国内外利用雨生红球藻培养法生产虾青素通常分两阶段进行：即首先实现微藻营养细胞的高密度生长，随后多通过设置高光照等人为胁迫手段，促使营养细胞转变为厚壁孢子，并积累虾青素Harker et al.，1996；Sarada et al.，2002）。 因此，胁迫条件是雨生红球藻积累虾青素的关键环节，并在很大程度上决定了虾青素的产量和质量。目前，尽管对光强、温度等传统胁迫因子的条件参数已基本确定Boussiba et al.，1992； Hagen et al.，2001），但高光等胁迫方式不仅导致细胞大量死亡，同时由于形成厚壁孢子，降低了生物的直接利用效率，并使虾青素的提取成本和难度大为增加。近年来，营养盐N、P等缺乏、盐胁迫以及不同波段光照等一些新的胁迫手段逐渐人们所重视，并为解决目前研究和生产中存在的关键问题提供了一些有益的思路Fabregas et al.，1998； Tan et al.，1995），但上述胁迫方式对雨生红球藻的生长和虾青素积累的影响研究仍不够深入细致，且缺乏系统性。开展了氮缺乏、盐胁迫及不同波段光胁迫等3种不同胁迫方式对雨生红球藻生长及虾青素积累影响的初步研究，以期为其后续的研究与应用开发提供参考。 一、材料与方法 1. 材料及培养条件雨生红球藻藻种由中科院水生生物研究所藻种库提供。采用BBM培养基配方，培养温度设为23±1 ℃，营养细胞培养阶段的光强设lux，7d后 2. 实验方法 在无的BBM培养基中添加不同浓度的NaNO3，分别为0 g/L、0.0125 g/L、0.025 g/L、0.05 g/L、0.125 g/L、0.25 g/L，每个实验组设置个重复。 在BBM培养基中添加不同浓度NaCl，0 g/L 、2.5 g/L 、5 g/L 、10 g/L 、20 g/L 个浓度梯度，每个实验组设置个重复。 1）分别采用红光、蓝光、绿光等3种单色光源及白色连续光源以下简称白光培养红球藻后，白光胁迫；每个实验组设个重复。 3. 分析方法采用HPLC法测定虾青素含量齐安翔等2005），藻细胞密度、藻粉干重等其他相关参数的测定见文献氮NaNO3）胁迫 NaNO3对雨生红球藻的生长曲线影响如图1所示。总体而言，氮盐对雨生红球藻的生长起到促进作用，其程度随NaNO3浓度的升高而显著。缺氮条件下0.012 g/L），微藻生长缓慢，但未受到抑制；当NaNO3浓度较高时，对生长的促进作用明显。 　　　　图1 不同NaNO3浓度对雨生红球藻生长影响比较 研究发现，当NaNO3浓度0.12 g/L时NaNO3浓度0.012 g/L和0 g/L，虾青素分别达到9.71 mg/L和11.03 mg/L表1Orosa等（2005）研究表明，缺氮条件下尽管雨生红球藻细胞生长十分缓慢，但虾青素含量为24.5 pg/cell，是高氮浓度下0.25g/L）的数十倍可见缺氮显著促进细胞内虾青素的积累陈兴才等2005；Orosa et al.， 2005）。此外，Orosa等（2005）报道的适宜藻细胞生长及虾青素积累的NaNO3浓度 g/L，高于此研究结果，这可能与藻种品系及培养基配方的不同有关。 此外，研究发现缺氮条件下，表1表1 不同NaNO3浓度对雨生红球藻胁迫阶段的影响 NaNO3g/L） 孢子%） 藻粉产量g/L） 虾青素产率mg/L） 虾青素含mg/g） 0 14.38 0.74 11.03 14.90 0.012 11.04 0.78 9.71 12.45 0.025 6.33 0.87 6.25 7.18 0.05 8.47 0.95 4.73 4.97 0.12 4.75 1.09 2.11 1.94 0.2