血管内皮生长因子对胃癌BGC823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响.docVIP

　　血管内皮生长因子对胃癌BGC823细胞多药耐药相关蛋白1启动子活性的影响 ：李娟, 许文林, 弓晋灵, 杨靖, 吴晓君, 陈巧云 【摘要】 目的： 检测血管内皮生长因子(VEGF)对多药耐药相关蛋白1(MRP1)基因启动子转录活性的影响并初步探讨其作用机制。方法： 合成MRP1启动子片段,克隆到荧光素酶报告基因载体PGL3Basic中;用脂质体2000将重组的报告基因载体与内参质粒β半乳糖苷酶(βgal)瞬时共同转染人胃癌BGC823细胞,检测VEGF作用后MRP1启动子活性的改变;继之,采用PI3K/AKT信号通路抑制剂LY294002预处理转染的细胞,再检测VEGF对MRP1启动子转录活性的影响。结果： 酶切鉴定和DNA序列分析表明成功地构建了重组PGL3BasicMRP1载体;荧光素酶活性分析表明重组PGL3BasicMRP1在BGC823细胞中具有启动子活性(144±3.0),与空载体PGL3Basic(60±4.910)相比,转录活性增高2.4倍,差异有统计学意义(Plt;0.01);VEGF能以剂量依赖的方式上调MRP1启动子区的转录活性,与无VEGF作用组(171±6.083)相比,最大活性(924±19.975)增高5.4倍(Plt;0.05);LY294002能够显著抑制VEGF对MRP1启动子区的转录激活,当LY294002浓度为50 μmol/ml时,MRP1启动子活性(392±25.541)与无LY294002作用组(1 001±11.533)相比下降2.5倍(Plt;0.05)。结论： VEGF对MRP1启动子活性具有上调作用,PI3K/AKT信号通路在这一过程中发挥了重要作用。 【关键词】 多药耐药相关蛋白1; 血管内皮生长因子; 荧光素酶报告基因; 启动子活性 　　[Abstract] Objective: To assess the efficacy and mechanism of vascular endothelial groultidrug resistanceassociated protein 1(MRP1) promoter. Methods： The promoter of MRP1 id ine 2000 reagent, and then detected the alteration of the MRP1 promoter activity after being treated oter activity. Results： The consequence of restriction enzyme digestion and nucleotide sequence analysis confirmed that the rebinant plasmid onstrated that the rebinant plasmid displayed marked activity(144±3.0) in BGC823 cells,about 2.4fold than that seen portantly, this activity anner,and the most pronounced activity(924±19.975) ore,LY294002 significantly supressed the effect of VEGF on the MRP1 promoter activity.pared oter ol/ml LY294002 (392±25.541) (Plt;0.05). Conclusion： VEGF could augment the activity of the MRP1 promoter, and PI3K/AKT signaling pathechanism of action. 　　[Key ultidrug resistanceassociated protein 1; vascular endothelial grooter activity 　　获得性多药耐药(multidrug resistance,MDR)目前仍是恶性肿瘤 治疗 的主要障碍之一。肿瘤细胞MDR的产生与多种因素有关,其中多药耐药相关蛋白1(MRP1)高度表达是主要机制之一。最近的研究表明,血管内皮生长因子(vascular endothelial groine2000购自Invitrogen公司, LY294002购自Cell Signaling公司,荧光素酶报告基因检测试剂盒及β半乳糖苷酶报告基因检测试剂盒购自碧云天生物技术研究所。 　　1.2 重组PGL3BasicMRP1报告基因质粒的合成