谷氨酸单钠对新生小鼠视网膜神经细胞c┐fos表达的影响.docVIP

　　谷氨酸单钠对新生小鼠视网膜神经细胞c┐fos表达的影响 摘 要:目的 观察谷氨酸对小鼠视网膜神经细胞c-fos表达的变化，探讨谷氨酸的神经毒性作用. 方法 昆明系小鼠妊娠晚期经口一次性大剂量谷氨酸钠ig（4.0g#12539;kg-1 ），仔鼠于出生后10，20和30d取眼球，多聚甲醛固定，恒冷切片，应用免疫组织化学方法对视网膜神经细胞c-fos的表达进行了观测. 结果 10，20和30日龄谷氨酸组小鼠视网膜神经细胞c-fos表达阳性神经元分别为1474，1250及859cells#12539;mm-2 ，比正常小鼠c-fos的表达明显增高（1474vs744cells#12539;mm-2 ，Plt;0.05;1250vs538cells#12539;mm-2 ，Plt;0.05;859vs404cells#12539;mm-2 ，Plt;0.05）. 结论 外源性谷氨酸作用于成长发育中仔鼠的视网膜神经细胞，并引起细胞内c-fos过度表达，可能诱导视网膜神经细胞凋亡. 　　Keyates;excitotoxicity;genes，fos;retina;mice 　　Abstract:AIM To observe the toxic effect of monosodium glutamate on the expression of c-fos in the retinal neurons in mice.METHODS Kunming mice onosodium glutamate via oral administration at the late stage of pregnancy.The eyeballs of filial mice oved on the postnatal days of10，20and30，the specimens then fixed aldehyde and sectioned into pathological slices by the Cryocut.Immunohistochemistry onosodium glutamate-treated mice，there m-2 positive immunoreactive neurons of c-fos on postnatal day10，1250cells#12539;mm-2 on postnatal day20，859cells#12539;mm-2 on postnatal day30m-2 in the normal mice retinas（1474vs744cells#12539;mm-2 ，Plt;0.05;1250vs538cells#12539;mm-2 ，Plt;0.05;859vs404cells#12539;mm-2 ，Plt;0.05）.CONCLUSION Exogenous monosodium glutamate has the effects on the developing retinal neurons that it can produce an overexprssion of c-fos in the retinal cells，corresponding ol#12539;L-1 PBS2min，接灌注预冷的40g#12539;L-1 多聚甲醛固定液3min.取出鼠眼后放在4℃多聚甲醛固定液中4h，再置于300g#12539;L-1 蔗糖溶液中4℃18～28h，待其沉底，去蔗糖溶液，用组织包埋剂附着，快速冷冻，-70℃保存. 　　1.2 方法 10，20和30d龄（P10，P20和P30）仔鼠眼在恒冷切片机上切成12～14μm厚度的组织切片，平铺于经硅化处理的载玻片上.每块组织切片周围涂上指甲油以防止液体流脱.切片从-70℃取出后室温下干燥30～45min，PBS浸洗10min，40g#12539;L-1 多聚甲醛30min，PBS冲洗，正常羊血清封闭10min，1∶150一抗4℃过夜（16h），生物素化二抗37℃孵育50min，链酶亲和素生物素酶复合物37℃孵育40min.每一步孵育后均用PBS冲洗，最后一次PBS冲洗后加DAB显色8～10min，组织切片呈现深棕色反应，在PBS中浸15min，乙醇梯度脱水，二甲苯透明，中性树脂封片.设立①不加一抗的阴性对照和②未使用谷氨酸的正常对照，其免疫组织化学步骤同上.相邻组织切片做Nissl染色以确定组织结构.Olympus光学显微镜下阅片并摄像.计数各组视网膜神经细胞阳性细胞数，应用SigmaStat2.0统计软件作方差分析. 　　2 结果 　　c-fos免疫阳性细胞在镜下胞核呈深棕色，圆