钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株CyclinD1表达的影响.doc

　　钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株 Cyclin D1 表达的影响 ：贾平平 吕军 邵国 姜树原 周立社 闫少春 【摘要】 目的: 研究钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株细胞周期蛋白（Cyclin）D1表达的影响,探讨钒化钠在细胞生长中的作用机制。方法:以体外培养小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株为研究对象,给予0、0.1、1.0、5.0、10.0、100.0、200.0μmol/L钒化钠,培养4小时后,用ethods: Mouse NIH3T3 cells gro orthovanadate at doses of 0, 0.1, 1.0, 5.0, 10.0, 100.0, 200.0 μmol/L respectively for 4 hours and the cell extracts ine the expression of cyclin D1. Results： After application for 4 hours, as pared orthovanadate at the dose of 5.0 or 10.0 μmol/L induces the expression of Cyclin D1 significantly ol/L, it causes the reduction of cyclin D1 expression. Conclusion: Sodium orthovanadate may affect the gro orthovanadate； NIH3T3 cell； Cyclin D1 　　细胞周期蛋白（Cyclin）D1是1991年发现的细胞周期蛋白,在静止细胞中不表达,经刺激因子刺激后表达增加[1]。Cyclin D1是调控细胞周期依赖性蛋白激酶(CDK)的主要成分,它通过对视网膜母细胞瘤蛋白（Rb）的灭活作用,使细胞从G1期顺利进入S期,促使细胞持续增殖[2]。近年来，已有学者证实低剂量的钒化钠促进细胞生长分裂，高剂量的钒化钠引发Cyclin D1水平的急剧下降[3]。本实验系统地研究不同浓度钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株Cyclin D1表达的影响,探讨钒化钠在细胞生长中的作用机制。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 细胞株 小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株，购于 中国 科学 院上海生科院细胞资源中心。 　　1.1.2 主要试剂 DMEM培养基（Gibico公司），胎牛血清（杭州四季青生物材料有限公司），胰蛋白酶（上海华美生物工程公司），台盼兰（上海华美生物工程公司），二甲基亚砜（Amersco），聚丙烯酰胺凝胶，Cyclin D1抗体，辣根酶标记山羊抗兔Ig抗体，ECL试剂盒（北京中山公司），其他试剂为分析纯。 　　1.1.3 主要仪器 二氧化碳培养箱（Thermoforma，美国），倒置相差显微镜（XDB-1B），超净工作台（SEM培养液中传代培养。 　　1.2.2 SF细胞裂解液在冰上裂解细胞，低温离心15分钟提取蛋白，BCA法蛋白定量。加上样缓冲液，100℃变性5分钟。每孔50μg蛋白上样，10%SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳。将蛋白电转到硝酸纤维膜上,用5%脱脂奶粉封闭1小时，加一抗稀释液(1∶1000稀释)4℃过夜，TTBS洗膜，结合辣根过氧化物酶标记二抗(1∶5 000稀释),TTBS洗膜，用ECL化学发光试剂在X光胶片上曝光、显影、定影。以β-actin为内参照，应用凝胶成像分析系统进行条带扫描分析结果，结果以蛋白条带的面积积分值与β-actin的面积积分值比值表示。实验重复3次。 　　1.2.3 统计学处理 采用SPSS11.0软件包对数据进行单因素方差分析,统计数据以均数±标准差（x±s）表示,Plt;0.05为差异有统计学意义。 　　2 结果 　　不同浓度钒化钠对小鼠成纤维细胞NIH3T3细胞株Cyclin D1蛋白表达的影响见图1，表1。Western blot技术检测结果显示，低浓度钒化钠引起NIH3T3细胞Cyclin D1蛋白表达增加，高浓度钒化钠引起NIH3T3细胞Cyclin D1蛋白表达降低见图2。 　　图2 不同浓度钒化钠处理组Cyclin D1蛋白质对βactin蛋白质的相对丰度（n=3）（略） 　　*与对照组比较Plt;0.05,**与对照组比较Plt;0.01 　　3 讨论 　　钒是化学元素周期表中VB族的过渡元素，广泛存在于 自然 界中,参与人体许多不同的生理过程,如细胞的生长和分化、糖类及脂类的代谢等[4]。更多研究结果表明，钒化钠和过氧钒化钠还可以在多种细胞体系中起到促进或抑制细胞生长分裂的作用[5]。钒化钠可以通过调节细胞周期相关蛋白实现对细胞生