连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响.doc

　　连翘提取物对小鼠T淋巴细胞体外活化与增殖的影响 ：尹乐乐, 曾耀英*, 黄秀艳, 侯会娜 【摘要】 　　目的: 分析连翘(FS)提取物对小鼠淋巴结T细胞的体外活化与增殖的影响, 初步探讨其免疫抑制作用机制。方法: 无菌分离小鼠淋巴结细胞, 加入多克隆刺激剂刀豆蛋白A(ConA)进行刺激, 利用荧光标记的单克隆抗体(mAb)染色结合流式细胞术(FCM), 检测小鼠T淋巴细胞的表达的活化抗原CD69、 CD25、 CD71的表达情况; 以羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯（CFDASE）染色, 以FCM分析FS对淋巴细胞体外增殖的影响。结果: 终浓度为40、 80、 160 mg/L的FS均对ConA刺激诱导的T细胞CD69、 CD25和CD71的表达有降低作用(Plt;0.05)。CFDASE染色分析显示, 上述浓度的FS对ConA诱导的小鼠T淋巴细胞增殖具有抑制作用(Plt;0.05)。结论: FS对ConA诱导的T细胞早、 中、 后期活化和体外增殖有抑制作用。 【关键词】 连翘提取物 T 淋巴细胞 活化 增殖 　　[Abstract] AIM: To investigate the effect of Forsythia suspensa (FS) extract on the activation and proliferation of the mouse T lymphocytes in vitro as munosuppressive effect. METHODS: The lymphocytes the lymphoid nodes of BALB/c mice. Fluorescence conjugated monoclonal antibodies and floetry phocytes in vitro in response to Concanavalin A (ConA). Stained ouse lymphocytes ulated by ConA. The effect of FS extract on cell proliferation in vitro etry. RESULTS: FS extract decreased the expression of CD69, CD25 and CD71 at the final concentration of 40, 80 and 160 mg/L, respectively（Plt;0.05）. CFDASE staining shophocytes induced by ConA (Plt;0.05). CONCLUSION: FS extract can inhibit the activation and proliferation of T lymphocytes in response to ConA. 　　 　　[Keyphocytes; activation; proliferation 　　连翘(Forsythia suspensa, FS )又名旱莲子、 大翘子、 落翘等, 为木犀科植物连翘的果实。它作为传统中药广泛应用于对炎症、 发热和溃疡等方面的 治疗 [1]。同时, FS的主要活性成分连翘苷在抗氧化、 抗菌、 抗病毒和解热抗炎等方面[2]也起着重要的作用。两者在药理作用上的一致表现均可提示FS对机体免疫系统可能具有一定的调节作用。本研究中采用流式细胞术(FCM)检测了FS对刀豆蛋白A(ConA)刺激的小鼠T细胞体外活化和增殖影响, 研究其免疫学效应并初步探讨其免疫作用机制。 　　 1 材料和方法 　　1.1 材料 清洁级BALB/c近交系小鼠(雄性, 8～10周龄, 体质量18～22 g), 购自广东省实验动物中心。FS购自四川广汗市维康植化有限公司, 为木犀植物连翘的干燥果实提取而成, 按干燥品 计算 含连翘苷不得少于0.15%。FS临用前用RPMI1640液稀释至所需浓度。L谷氨酰胺、 β巯基乙醇、 刀豆蛋白A(ConA)购自Sigma公司。PE抗CD3单克隆抗体(mAb）、 FITC抗CD69 mAb、 PE抗CD25 mAb和PE抗CD71 mAb购自PharMingen公司。羧基荧光素乙酰乙酸(carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester, CFDASE)购自美国Molecular Probes公司。RPMI1640培养基、 胎牛血清(FBS)为美国GibcoBRL公司产品。流式细胞仪(FACS Calibur)为美国Becton Dickinson公司产品。 　　1.2 方法 　　1.2.1 淋巴细胞悬液的制备 断颈