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知母中总皂苷提取工艺优化 指导老师: 刘汉珍 答 辩 人: 赵天文 专业班级: 中药学112班 知母中总皂苷提取工艺优化 一、研究目的意义 知母来源于知母为百合科植物知母Anemarrhena aspho-deloides Bge.的根茎,近年来 , 对知母中化学成分及其药理药效方面的研究文献不计其数，对其总皂苷的研究内容有了很大进展。 本实验结合对以前方法的分析，优选出知母中总皂苷的最佳提取方案。 优选出的最佳工艺设计一方面可以为进一步的研究提供试验依据，另一方面可以为实际生产提供理论基础。 二、实验方法 二、实验方法 二、实验方法 二、实验结果 3、正交试验设计 正交试验结果如下： 四、讨论与结论 二、实验方法 * 研究目的意义 实验方法 实验结果 讨论与结论 一、 二、 三、 四、 1.知母总皂苷提取的方法 准确称取3g脱脂后的知母粉末，置于具塞锥形瓶中，按照一定固液比、乙醇浓度、温度、提取时间等条件下超声提取2次，合并所得提取液，离心后弃去沉淀，取上层液体，抽滤，取滤液，浓缩至适当体积，用等量的水饱和正丁醇溶液萃取三次，取上层溶液合并，浓缩至干燥，残渣用乙醇溶解，定容至25mL容量瓶中得供试品溶液备用。 2.测定方法 精密吸取0.1mL供试品溶液，置于10mL具塞试管中，在90℃水浴条件下挥干试剂，加入0.2mL新配制的5%香草醛-冰醋酸溶液，再加入0.8mL高氯酸溶液，混匀，在60℃水浴中恒温加热15min，用冷水流动冷却至室温，最后加5mL冰醋酸，摇匀，放置20min左右，在波长546nm处测定溶液的吸光度，用60%乙醇溶液做空白对照。并根据标准曲线计算知母中总皂苷的提取率。 3.单因素试验 在保持其他因素相同的条件下，分别考虑不同乙醇的提取浓度、料液比、提取时间、提取温度等对知母总皂苷提取虑的影响。 4.正交试验设计 根据单因素实验结果设计正交试验，得到最佳提取工艺。 1.人参皂苷标准曲线 2.单因素试验 图1 提取时间对提取率的影响 图4 乙醇浓度对提取率的影响 图3 提取时间对提取率的影响 图2 料液比对提取率的影响 根据单因素试验结果设计正交因素水平表如下： 80 40 1:14 80 3 70 30 1:12 70 2 60 20 1:10 60 1 提取温度 （℃）D 提取时间 （min）C 料液比 B 乙醇浓度 （%）A 水平 1.08 0.55 1.20 0.56 R 4.86 6.04 6.05 5.20 K3 5.94 5.44 5.49 5.76 K2 5.58 5.58 4.85 5.42 K1 1.98 1 2 3 3 9 1.44 3 3 2 3 8 1.78 2 1 1 3 7 1.96 2 1 3 2 6 2.49 1 3 2 2 5 1.31 3 2 1 2 4 2.11 3 3 3 1 3 2.20 2 2 2 1 2 1.11 1 1 1 1 1 D C B A 总皂苷提取率% 因素 试验号 由上表中的数据可得，知母总皂苷的最佳提取条件是A2B3C3D2，即乙醇的浓度为70%，选取的料液比为1:14，提取时间为40min，提取温度为70℃，超声提取次数为2次。表中极差R的大小为RDRBRARC，说明提取温度对知母中总皂苷的提取影响最大，提取的料液比对结果的有一定的影响，而提取时间和使用的乙醇浓度影响相对较小。 通过以完成上试验，可以确定优选的提取工艺为：选择过40目筛的知母粉末，加入14倍量的70%乙醇溶液，在70℃的温度条件下，超声提取2次，每次40min，知母总皂苷的提取率为2.50%，这一优选条件也得到了很好的验证，可以为以后的研究提供试验依据，为工业生产提供理论基础。 在正交试验结果中，温度是影响总皂苷提取的最大影响因素，因为温度的高低直接影响皂苷的化学结构，另外，温度的升高也会影响乙醇的挥发。 1.知母总皂苷提取的实验流程： 药材的预处理 粉碎、过40目筛 过滤 提取 脱脂 浓缩 检测 溶解 合并滤液 萃取 蒸干溶剂 显色 计算、确定含量 请各位老师批评指正 谢 谢 ！