3第四章转录续-加工.pptVIP

第七节 转录后加工 转录产生的RNA称为原始转录产物或原初转录本，通常要经过进一步加工才能成为有功能的各种RNA。 mRNA的加工 原核生物的rRNA和tRNA比较稳定，半衰期为几个小时。 tDNA初始转录产物有时包含几个同种tRNA，有时包含几个不同种tRNA，而有些tRNA与rRNA转录在一起。 Ⅰ型tRNA基因含有CCA序列，在CCA序列下游仍有一段序列，需要在酶的作用下切除。 RNA酶Ⅲ：负责切开间隔序列。 真核生物的转录后加工 真核生物的rRNA有4种，即5.8S、18S、28S和5S rRNA。 随后切除内含子，并将两个半个的tRNA分子连接在一起。 加工过程中，首先切除3’端额外的核苷酸， 在tRNA核苷酸转移酶作用下，在3’端添加CCA序列，产生成熟的3’末端。 核酸内切酶使用测量机制确定切割点，在内含子两端切割，产生一个线性内含子和两个tRNA半分子。 两个半分子tRNA具有独特的末端： 5’端为-OH，3’端为环状磷酸基团。 什么是断裂基因？ 一般情况下，外显子较短（100-200bp），内含子较长（＞1kb）。 是否还曾记得？？ CTD在RNA加工过程中可能是一个关键点： 5’端加帽酶（鸟苷酸转移酶）结合在CTD上 与剪接相关的蛋白质也结合在CTD上 3’端聚腺苷酸化装置也结合在CTD上 polyA是由polyA聚合酶（polyA polymerase，PAP）催化合成，而非由DNA编码。 在胚胎发育过程中，非poly（A）化的mRNA作为一种贮存形式，在poly（A）化后开始翻译。 mRNA的polyA在分子生物学操作技术中有很大应用价值： 剪接位点 剪接位点（splicing site）：指内含子与外显子交界处的序列。内含子上游的剪接点称为5’剪接点或左剪接点或供体位点（donor site），下游方向的剪接点称为3’剪接点或右剪接点或受体位点（acceptor site）。 高等真核生物分支位点没有高度保守性，但在每一位点都有嘧啶或嘌呤的偏好。 剪接过程 第一次转酯（transesterification）反应：分支点序列中A残基上的2’羟基攻击内含子5’端剪接点处G之前的磷酸二酯键，发生第一次转酯反应，形成一个称为索套的带尾的环状结构，释放出外显子1。 反式剪接 一般情况下，只有同一条RNA分子上的不同外显子通过剪接连接在一起，称为顺式剪接（cis splicing）。 可变剪接：特定内含子保留成为外显子（内含子保留）；或特定的外显子被剪切，在成熟的mRNA中不保留该外显子（外显子跳读） 。 RNA编辑可由向导RNA指导。 单一加工复合体同时负责切割和多聚腺苷酸化。 切割因子CFⅠ和CFⅡ构成内切酶活性区域 专一性因子CPSF识别AAUAAA序列，并指导其他活性的发生 一种刺激因子CstF结合到富含GU区 PAP进行A残基的逐个添加。约添加200个A后，复合物解体。 PABP结合在polyA上，增加mRNA稳定性。 poly（A）的功能： 有助于稳定mRNA分子，因此，与mRNA的寿命相关。但poly（A）的长度与mRNA寿命没有相关性。 mRNA的poly（A）化有利于翻译，为核糖体提供识别mRNA的信号，其具体机制尚不清楚。 mRNA分离：利用oligo（dT）与载体相连，可以从总RNA中纯化mRNA。 cDNA合成：利用oligo（dT）作为引物，可以反转录合成cDNA。 RNA的剪接 回顾几个基本概念： 断裂基因（interrupted gene）：真核生物的基因含有内含子，称为断裂基因。 内含子（intron） ：真核生物的基因序列中某些序列不出现在成熟的mRNA中，这些序列称为内含子。 外显子（exon） ：被内含子隔开的出现在成熟mRNA中的序列称为外显子。 RNA剪接（RNA splicing） ：一个基因的外显子和内含子共同转录在一条转录产物中，然后内含子被切除，外显子被连接起来形成成熟的RNA，这一过程称为RNA的剪接。 GU-AG规则：内含子两端剪接位点的识别是根据起始点为双核苷酸GU，结束位点为AG来确定的，剪接位点的这种特征常常称为GU-AG规则。 GU-AG规则在真核生物核基因mRNA剪接中具有普遍适用性。 核基因mRNA剪接所需要的序列特征 分支位点（branch site） 分支位点在3’端剪接点的识别中起重要作用。 酵母分支位点是高度保守的，共有序列UACUAAC。 3’端附近有一个富含嘧啶的区域 第二次转酯反应：外显子1的3’羟基攻击内含子剪接点3’AG之后的磷酸二酯键，发生第二次转酯反应，两个外显子连接在一起。 内含子以索套形式释放，最终被降解。 在少数特殊情况下，两个RN