一种基于聚合酶链式反应检测SNP的方法.pdfVIP

( ) 中国农业大学学报 　2006 ,11 3 : 5 1 55 Journal of China Agricultural University 一种基于聚合酶链式反应检测 SNP 的方法 郑艳萍1 ,2 　Chander Subhash 1 ,2 　杨小红1 ,2 　周俊青1 ,2 　李建生1 ,2 　严建兵1 ,2 ( 1. 中国农业大学 农学与生物技术学院 , 北京 100094 ; 2 . 国家玉米改良中心 , 北京 100094) 摘 　要 　SN P 是具有广泛利用潜力的第 3 代分子标记 ,本文旨在开发一种利用 PCR 技术快速检测 SN P 的方法 。 设计思路是 :根据已知 SN P 位点设计 2 条特异正向引物 ,其最后一个碱基分别与已知 SN P 的 2 个碱基相同 , 同时 ( ) 在 1 条引物的 5′端添加 1 段 20 bp 左右的其他物种的特异序列 如细菌 DNA 序列 ,然后选择 1 条合适的反向引 物 ;最后同时加入 3 条引物 ,通过梯度 PCR 选择合适的退火温度进行 PCR 反应 。利用这一方法成功将玉米的 ZDS 基因定位在玉米第 7 染色体短臂 7 02 Bin 。这种检测 SN P 的方法设计简单 ,费用低廉 ,尤其适合 SN P 标记的分子 标记连锁图构建或者基因定位 。 关键词 　AlleleComp etitive PCR (ACPCR) ; 单核苷酸多态性 ; 基因定位 中图分类号 　Q 34317 ; S 5 13 　　　　文章编号 　1007 4333 (2006) 03 005 1 05 　　　　文献标识码 　A Metho d for det e cting SNP b a se d on PCR t e chnique Zheng Yanping1 ,2 , Chander Subha sh1 ,2 , Yang Xiaohong1 ,2 , Zhou Junqing1 ,2 , Li J iansheng1 ,2 , Yan J ianbing1 ,2 ( 1. College of Agronomy and Biot echnolo gy , China Agricultural Univer sity ,Beijing 100094 ,China ; 2 .National Maize Improvement Cent er of China , Beijing 100094 ,China) Ab stract 　SN P is one kind of p ow erful mole cular markers . The p urp os e in this stu dy w a s t o e st a blish a simp le method of det e cting SN P b a s e d on PCR t e chnique . Tw o sp e cific forw ard p rimers w ere synthe siz e d , b oth w ere in c onformity with the found SN P in the la st nucle otide . A 19 bp p e cicific s e quenc e w a s a dde d int o one p rimer with other sp e cie s ’s e quenc e ( e g . Ba ct eria DNA s e quenc e) in 5 ’end . The s ame rev ers e d p rimer w a s s ele ct e d usi