丹参转基因毛状根离体培养体系的建立及分析_张夏楠.pdfVIP

第 37 卷第 15 期 Vol. 37 ，Issue 15 20 12 年 8 月 August ，20 12 · · 资源与鉴定 丹参转基 因毛状根离体培养体系的建立及分析 * ， ， ， 张夏楠 崔光红 蒋喜红 黄璐琦 ( ， 100700) 中国中医科学院 中药研究所 北京 ［ ］ : 。 : 、 摘要 目的 建立起丹参 的转基 因毛状根诱导及离体培养体系 方法 考察 了不同外植体 不同农杆菌侵染 时间和共 ， 400 g ·L － 1 Cef 5 min ， MS + 400 g ·L － 1 Cef + 2. 5 g ·L － 1 Hyg 培养时间诱导丹参毛状根的效率 共培养外植体用 水除菌 接种在 ， 6 ，7-V + 2. 5 g ·L － 1 Hyg ，GFP ，PCR 的固体培养基上 完全除菌后转接入 液体培养基继代培养 荧光检测 阳性毛状根 检测农杆 rolC ， I 。 : ， 菌特征基 因 并测定不同生长时期的毛状根干重和二氢丹参酮 的积累 结果 用丹参叶片基部诱导毛状根 成功率可达 到 93. 3% ; 农杆菌侵染 10 min 诱导效率最高为 63. 3% ; 共培养 2 ～ 3 d 诱导效果最好; PCR 结合 GFP 荧光检测 的方法鉴定 阳性 转基 因材料具有较高 的可信性; 丹参毛状根生物量变化与次生代谢物积累之间有着 紧密联系 。结论: 成功建立起丹参转基 因 ， 。 毛状根离体培养体系 为进一步 的基因工程应用打下基础 ［ ］ ; ; ; 关键词 丹参 毛状根 转基 因 离体培养 Salvia miltiorrhiza Bunge. ， 。 ， 唇形科植物丹参 是治 不 明 制约其发展 进行代谢途径改良 建立稳定高 ， 2 疗心血管系统疾病 的临床常用 中药 主要含有 种 产的毛状根株系是药用植物次生代谢工程 的一种有 ， 。 1 ，4 - - - 有效成分 脂溶性的二萜醌类化合物和水溶性的 酚 效工具 如在莨菪 中共转化 丁二胺 氮 甲基转 ， 、 、 酸类化合物 具有抗菌消炎 抗血栓形成 抗心肌缺 6- - ， 移酶基 因和莨菪碱 β