水霉菌总DNA提取方法研究.pdfVIP

第 32 卷 第 1 期 水 生 生 物 学 报 Vol . 32 ,No . 1 2 0 0 8 年 1 月 ACTA HYDROBIOLOGICA SINICA Jan. , 2 0 0 　8 水霉菌总DNA 提取方法研究 1 ,2 1 3 1 ,2 1 可小丽 　汪建国 　顾泽茂 　李 　明 　龚小宁 (1 中国科学院水生生物研究所 ,武汉　430072 ; 2 中国科学院研究生院,北京　100039 ; 3 华中农业大学水产学院,武汉　430070) 摘要 :本实验采用 EP 管反复冻融和研磨的破壁方式 ,利用溶菌酶法 、CTAB 法 、改良CTAB 法 、尿素法 、十二烷基硫酸 ( ) ( ) 钠 SDS 法等 5 种方法 ,分别对 5 种鱼类致病性水霉菌 寄生水霉 、多子水霉 、异株水霉及两未定种 的基因组 DNA ( ) 进行提取 ,并采用紫外分光光度计和 ITS 区基因 包括 58S rDNA PCR 扩增对 DNA 进行了评价 。紫外分光光度计 检测结果表明 ,5 种方法均可提取到水霉菌 DNA ,其中改 良CTAB 法提取的 5 种水霉菌的 DNA 产量和质量最高 , A / A 在 179 —182 之间 ,浓度为 45μ 260 280 g/ mL ;PCR 检测结果表明 ,只有改良CTAB 法提取的DNA 全部扩增到明亮 、 整齐 、无拖尾的特异性条带 ,其他几种方法均存在暗带或无带现象 。因此 ,改良CTAB 法可以作为水霉菌 DNA 提取 以开展分子生物学研究的首选方法 。 ( ) ( ) 关键词 :水霉菌 ;DNA 提取 ;溶菌酶 ;十六烷基三甲基溴化铵 CTAB ;尿素 ;十二烷基硫酸钠 SDS ( ) 中图分类号 :Q33 　　文献标识码 :A 　　文章编号 2008 ( ) 　　水霉菌 Saprolegnia sp 是鱼类真菌性疾病的 种水霉菌 DNA ,获得量较少 , 同时含有较多杂质 ,不 主要病原 ,一般通过菌丝和孢子感染鱼体和鱼卵 ,对 利于进一步的分子生物学研究 。本研究采用 EP 管 水产养殖业危害极大[1 —6 ] 。开展水霉菌的致病分子 反复冻融和研磨 的破壁方式 , 比较 了溶菌酶法 、 机制 、品种分子标记鉴定及基因诊断等分子生物学 CTAB 法 、改良CTAB 法 、尿素法和 SDS 法对寄生水 研究 ,都需要获得高质稳定的基因组 D