解淀粉芽孢杆菌单链核苷酸介导的同源重组系统的构建.pdfVIP

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2017-08-25 发布于湖北
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解淀粉芽孢杆菌单链核苷酸介导的同源重组系统的构建.pdf

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解淀粉芽孢杆菌单链核苷酸介导的同源重组系统的构建

现代食品科技 Modern Food Science and Technology 2016, Vol.32, No.8 解淀粉芽孢杆菌单链核苷酸介导的同源重组系统的构建 1,2 1 1 廖瑜玲，潘力，王斌（1.华南理工大学生物科学与工程学院，广东广州 510006）（2.广东肇庆星湖生物科技股份有限公司，广东肇庆 526040）摘要：解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens ）是一类重要的工业微生物，在农业、医药和食品等领域有广泛用途。为了开发高效的基因操作技术，在解淀粉芽孢杆菌中引入单链核苷酸（ssDNA ）介导的同源重组方法。首先，通过敲除mutS 基因干扰解淀粉芽孢杆菌的错配修复系统，然后导入单链结合蛋白（Beta ）表达质粒，构建了宿主菌B. amyloliquefaciens XH7(mutS- + ，bet )。其次，通过设计 88 bp 的ssDNA 电转化导入以上构建的宿主菌中实现了以rpoB 基因为靶点的有效同源重组，转化株产生利福平抗性。实验优化了ssDNA 介导同源重组的参数：75 μg 的ssDNA，电转细胞复苏时间为6~12 h。本研究首次成功实现了ssDNA 同源重组技术在解淀粉芽孢杆菌的应用，对解淀粉芽孢杆菌和其它难转化的芽孢杆菌属进行有效的遗传操作手段提供新的思路。关键词：单链核苷酸；同源重组；解淀粉芽孢杆菌；错配修复系统；单链结合蛋白文章篇号：1673-9078(2016)8-96-102 DOI: 10.13982/j.mfst.1673-9078.2016.8.015 Construction of Single-stranded Oligonucleotide-mediated Homologous Recombination in Bacillus amyloliquefaciens 1,2 1 1 LIAO Yu-ling , PAN Li , WANG Bin (1.School of Bioscience and Bioengineering, South China University of Technology, Guangzhou 510006, China) (2.Star Lake Bioscience Co., Inc. Zhaoqing, 526040, China) Abstract: Bacillus amyloliquefaciens is an important industrial microorganism that