苎麻属植物RAPD-PCR反应体系的双重正交法优化-云南农业大学.PDF

第２５卷　第６期 　　　　　　　　　　　　　　云南农业大学学报　　　　　　　 Ｖｏｌ２５　Ｎｏ６ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＹｕｎｎａｎＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ２０１０年　１１月 　　　　　　　　　　 　　　　　 Ｎｏｖ．２０１０ 苎麻属植物ＲＡＰＤＰＣＲ反应体系的双重正交法优化 １ ２ ２ ２ 蒙祖庆 ，刘立军 ，汪　波 ，彭定祥 （１西藏农牧学院植物科学技术学院，西藏 林芝 ８６００００； ２华中农业大学 植物科学技术学院，湖北 武汉４３００７０） 摘要：以苎麻属植物为材料，研究苎麻属植物ＲＡＰＤ分析中的主要影响因素，采用差异性材料ＤＮＡ为模板和 双重正交优化设计的方法。建立苎麻属植物ＲＡＰＤＰＣＲ反应体系：２５ Ｌ反应体系中含ＴａｑＤＮＡ聚合酶 １５ μ ２＋ Ｕ，Ｍｇ ２１ｍｍｏｌ／Ｌ，ｄＮＴＰ０２ ｍｏｌ／Ｌ，Ｐｒｉｍｅｒ０７５ ｍｏｌ／Ｌ，模板ＤＮＡ１５０ｎｇ。最佳扩增程序：先９４℃变 μ μ 性４ｍｉｎ，再９４℃变性４５ｓ，３７℃复性４５ｓ，７２℃延伸９０ｓ共３６个循环，最后７２℃延伸５ｍｉｎ，４℃保存。经 检验，该体系能适应苎麻属多个种植物的ＲＡＰＤＰＣＲ的正常扩增。 关键词：苎麻属植物；ＲＡＰＤＰＣＲ反应体系；双重；正交优化设计 中图分类号：Ｓ５６３１　　文献标识码：Ａ　　文章编号：１００４－３９０Ｘ（２０１０）０６－０７５８－０５ ＤｏｕｂｌｅＯｒｔｈｏｇｏｎａｌＯｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎｆｏｒＲＡＰＤＰＣＲ ＲｅａｃｔｉｏｎＳｙｓｔｅｍｉｎＢｏｅｈｍｅｒｉａＪａｃｑ． １ ２ ２ ２ ＭＥＮＧＺｕｑｉｎｇ，ＬＩＵＬｉｊｕｎ，ＷＡＮＧＢｏ，ＰＥＮＧＤｉｎｇｘｉａｎｇ （１ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＴｉｂｅｔＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＡｎｉｍａｌＨｕｓｂａｎｄｒｙＣｏｌｌｅｇｅ，Ｌｉｎｚｈｉ８６００００，Ｃｈｉｎａ； ２ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＰｌａｎｔＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｂａｓｅｄｏｎｄｏｕｂｌｅｏｒｔｈｏｇｏｎａｌｏｐｔｉｍｕｍｄｅｓｉｇｎ，ｕｓｉｎｇＢｏｅｈｍｅｒｉａＪａｃｑ．ＤＮＡａｓｔｅｍｐｌａｔｅ，ｔｈｅ ｆａｃｔｏｒｓｉｎｆｌｕｅｎｃｉｎｇＲＡＰＤｗｅｒｅａｎａｌｙｚｅｄ．ＰＣＲｓｙｓｔｅｍｆｏｒＲＡＰＤｉｎＢｏｅｈｍｅｒｉａＪａｃｑ．ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ： ２５ Ｌｒｅａｃｔｉｏｎｓｏｌｕｔｉｏｎｃｏｎｔａｉｎｅｄ０７５ ｍｏｌ／Ｌｒａｎｄｏｍｐｒｉｍｅｒｓ，１５０ｎｇＤＮＡｔｅｍｐｌａｔｅ，２１ｍｍｏｌ／Ｌ μ μ ２＋ Ｍｇ ，０２ ｍｏｌ／ＬｄＮＴＰ，１ＵＴａｑｐｏｌｙｍｅｒａｓｅＴｈｅｓｕｉｔａｂｌｅｐｒｏｃｅｄｕｒｅｉｓｏｎｅｃｙｃｌｅ９４℃ｆｏｒ４ｍｉｎ； μ ｄｅｎａｔｕｒｉｎｇａｔ９４℃ｆｏｒ４５ｓ；ｐｒｉｍｅｒａｎｎｅａｌｉｎｇａｔ３７℃ｆｏｒ４５ｓ，ｅｘｔｅｎｓｉｏｎａｔ７２℃ｆｏｒ９０ｓ，３６ｃｙｃｌｅｓ； ｅｘｔｅｎｓｉｏｎａｔ７２℃ｆｏｒ５ｍｉｎａｔｌａｓｔａｎｄｔｈｅｎｒｅｍａｉｎｇａｔ４℃Ｂｙｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ，ｔｈｅｒｅａｃｔｉｏｎｓｙｓｔｅｍｓｗｅｒｅ