IMAGING-PAM基本实验操作步骤.PDFVIP

IMAGING-PAM 基本实验操作步骤 仪器的开机及设置 1．测定前请先仔细阅读说明书。 2 ．按照说明书，将所有连线正确连接。 3 ．在“我的电脑”右键——》“属性”——》“设备管理器”中，点击COM 端口，设置USB 延迟时间为8ms，并记下COM 端口序号。 4 ．打开主机和电源开关。 5 ．电脑上双击运行ImagingWin.exe 6 ．在弹出的对话框中选择相应的探头类型及 COM 端口号。仪器随后弹出的对话框一律选 OK 即可。 7 ．下图中，根据成像探头上的参数值，将 Absorptivity 中的 red gain、red intensity、NIR intensity 分别设定。 8 ．将被测材料放置好。 9 ．添加兴趣点（在窗口右侧的AOI 区域，先单击Add ，然后在叶片相应区域单击选定）可 添加多个兴趣点，也可点击Reset 全部清空，或Delete 删除特定的兴趣点。选择区域之 后，旁边会显示该测量区域的序号及荧光值。 10． 选择窗口上部Setting 选项卡，进行基本设置。通常需要设置Meas. Light 测量光和 Act. Light 光化光即可（设置Meas. Light 的intense 和gain ，使AOI 区域的荧光值在0.1-0.2 之间。Act. Light 可根据需要设置光化光的强度，数字对应的光强在AL-List 菜单中查看， 一般选用植物生长时的光强） 最大光量子产量Fv/Fm 及实际光量子产量Yield 的测量： 1．用黑布将待测叶片或枝条蒙上，暗适应处理20 分钟以上。（最好开机之前就进行提前处 理完毕） 2 ．点击窗口下面的F0，Fm 按钮，一秒钟之后，最大光量子产量Fv/Fm 测量完毕。 3 ．将窗口下面的AL （光化光）前的方框打钩，打开光化光。 4 ．待荧光值稳定后（大约三到五分钟），点击窗口下面的“SAT-PULSE”，即可测量一组在对 应光强下叶片的实际光量子产量 Yield 及其他所有的荧光参数。所有操作请尽量用黑布 将测量头遮盖，避免外界光对实验的影响。 荧光诱导动力学曲线的测量： 1．先对样品暗处理20 分钟以上，选择窗口上部Kinetic 选项卡，单击窗口右侧的Start 按钮， 仪器开始测定荧光诱导曲线（持续约5min ）。曲线自动测量。窗口上面有一行空白，可 根据要求加注实验名称等。 2 ．结束后，选择窗口上部Report 选项卡，在窗口右侧选择需要的参数，点击窗口上部的 按钮，将数据导出为csv 文件（该文件可用Excel 打开）。 快速光曲线的测量： 1．选择窗口上部Light Curve 选项卡，单击窗口右侧的Edit 按钮，打开光强列表，在intense 一列中更改光强梯度，由小到大进行设置（对应的 PAR 强度会自动更改），在时间一栏 一般填2 或3 。选为0 表示软件运行到该光强会自动停止。点OK 设置完毕。 2 ．点击Start 按钮，一起开始测定快速光响应曲线。（如弹出要求保存数据可根据需要保存）。 窗口上面有一行空白，可根据要求加注实验名称等。 3 ．结束后，选择窗口上部Report 选项卡，在窗口右侧选择需要的参数，点击窗口上部的 按钮，将数据导出为csv 文件 （该文件可用Excel 打开）。 实验数据的导出保存： 1．测量数据导出：选择窗口上部Report 选项卡，在窗口右侧选择需要的参数，点击窗口上 部的 按钮，将数据导出为csv 文件（该文件可用Excel 打开）。（注意，文件打开之后 需要进行分列。具体方法是：将第一竖列数据选中，点击工具栏中的“数据”——）“分 列”——》“按照分隔符”——》分号前打钩——》完成）。 2 ．图片导出：选择窗口上部 Imag 选项卡，选择所要的参数的图片，然后在左下角选择测 定的时间，点击旁边的 按钮，即可保存出图片。 3 ．测量原始文件导出与保存：点击窗口左下面的文件保存图标，即可保存为PIM 文件。该 文件含所有实验测定时的数据，可用IMAGWIN 软件重新打开。 测定完成并数据保存之后，先关电脑，然后关机，再将电源线从插线板上拔 出。最后将仪器连线拆除。 注意事项： 1. IMAGING-PAM 属于高级研究型仪器，仪器应轻拿轻放，操作前请仔细阅读 操作指南。 2. 仪器应放置在防潮、防尘、通风、远离热源的地方。 3. 建议使用带过载