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高中生物-专题1-基因工程同课异构阶段复习课课件-新人教版选修3
* 阶段复习课 专题1 【答案速填】 ①限制酶 ②载体 ③基因表达载体的构建 ④目的基因的检测与鉴定 ⑤转基因植物 ⑥基因工程药物 ⑦对基因改造 一、DNA重组技术的基本工具 1.与DNA分子有关的酶: (1)几种酶的比较: 项目 种类 作用底物 作用部位 作用结果 限制酶 DNA分子 磷酸二酯键 形成黏性末端 或平末端 DNA连接酶 DNA 分子片段 磷酸二酯键 形成重组 DNA分子 项目 种类 作用底物 作用部位 作用结果 DNA聚合酶 脱氧核苷酸 磷酸二酯键 形成新的 DNA分子 DNA(水解)酶 DNA分子 磷酸二酯键 形成脱氧 核苷酸 DNA解旋酶 DNA分子 碱基对间 的氢键 形成单链 DNA分子 反转 录酶 脱氧核苷 酸 磷酸二酯 键 以RNA为模 板形成DNA 分子 (2)DNA连接酶和DNA聚合酶的区别。 ①DNA聚合酶的作用对象是游离的脱氧核苷酸,能够将游离的脱氧核苷酸连接到已存在的DNA片段上;DNA连接酶是连接两个已存在的DNA片段成为一个整体。 ②DNA连接酶不需要模板,DNA聚合酶发挥作用需要模板。 ③DNA连接酶应用于将目的基因与载体连接起来形成重组DNA;DNA聚合酶可用于获取目的基因。 2.载体: (1)作用。 ①作为运载工具,将目的基因转移到受体细胞内。 ②利用它在受体细胞内对目的基因进行大量复制。 (2)具备的条件。 ①能在受体细胞内稳定保存并大量复制。 ②有多个限制酶切割位点,以便与外源基因连接。 ③具有特殊的标记基因,以便进行筛选。 (3)种类。 ①质粒:一种裸露的、结构简单、独立于细菌拟核DNA之外,能够自我复制的很小的双链环状DNA分子。 ②λ噬菌体的衍生物。 ③动植物病毒。 【特别提醒】 限制酶使用的四个易错点提醒 (1)限制酶断裂的是磷酸二酯键,而不是两个碱基之间的氢键。 (2)获取目的基因和切割载体时一般使用相同的限制酶,目的是产生相同的黏性末端以便于连接。 (3)获取一个目的基因需限制酶剪切两次,分别在目的基因的两端,共产生4个黏性末端或平末端。 (4)限制酶切割位点的选择必须保证至少一个标记基因的完整性,以便于进行筛选。 【训练1】下列关于各种酶作用的叙述,不正确的是 ( ) A.DNA连接酶能使不同脱氧核苷酸的磷酸与脱氧核糖连接 B.RNA聚合酶能与基因的特定位点结合,催化遗传信息的转录 C.一种DNA限制酶能识别多种核苷酸序列,切割出多种目的基因 D.反转录酶可以用于获得目的基因 【解析】选C。DNA连接酶的作用是形成磷酸二酯键;RNA聚合酶能以DNA的一条链为模板转录形成相应的mRNA;一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列,并断裂特定两个核苷酸之间的磷酸二酯键;在反转录法获取目的基因时要用到反转录酶。 二、基因工程的基本操作程序 1.PCR技术和DNA复制的比较: 比较项目 PCR技术 DNA复制 相同点 原理 DNA双链复制(碱基互补配对) 原料 四种游离的脱氧核苷酸 条件 模板、酶等 比较项目 PCR技术 DNA复制 不同点 解旋 方式 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 场所 生物体外 主要在细胞核内 酶 热稳定DNA聚合酶(Taq酶) 细胞内含有的DNA聚合酶 结果 在短时间内形成大量的DNA片段 形成整个DNA分子 2.基因表达载体的构建: 3.将目的基因导入受体细胞: 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 常用方法 农杆菌转化法 显微注射技术 感受态细胞法 受体细胞 体细胞 受精卵 原核细胞 生物种类 植物细胞 动物细胞 微生物细胞 转化过程 将目的基因插入Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合到受体细胞染色体的DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+处理细胞→感受态细胞→重组表达载体与感受态细胞混合→感受态细胞吸收DNA分子 4.目的基因的检测与鉴定: 类型 检测内容 方法 结果显示 分子 检测 导入 检测 转基因生物的DNA上是否插入了目的基因 DNA分子杂交技术(DNA和DNA之间) 杂交带 转录 检测 目的基因是否转录出mRNA 分子杂交技术(DNA和mRNA之间) 杂交带 翻译 检测 目的基因是否翻译成蛋白质 抗原—抗体杂交 杂交带 个体生物 学水平 鉴定 包括做抗虫、抗病的接种实验,以确定是否具有抗性以及抗性的程度;对基因工程产品与天然产品的功能进行活性比较,以确定其功能活性是否相同 【训练2】(2015·汕头高二检测)在某些深海鱼中发现的抗冻蛋白基因afp对提高农作物的抗寒能力有较好的应用价值。下图是获得转基因莴苣的技术流程,请据图回答下列问题: *
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