解脲支原体[UU]核酸扩增[PCR]荧光检测试剂盒.docxVIP

解脲支原体(UU)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒???? 深圳匹基生物工程有限公司开发的解脲支原体(UU)核酸扩增(PCR)荧光检测试剂盒具有以下特征：?1. 高灵敏度：荧光PCR方法由于其光敏感特性，灵敏度显著高于传统的PCR电泳方法。?2. 高特异性：对沙眼衣原体、淋球菌、人乳头瘤病毒等的检测均保持良好的阴性结果。3. 防污染：与电泳法等不同，该试剂盒无须PCR后处理，完全闭管扩增和检测，同时采用了dUTP-UNG系统，有效地防范了PCR扩增产物的污染，避免假阳性结果，提高临床诊断依据的可靠性。?4. 操作简单、耗时短：试剂盒在特定的荧光PCR检测仪上进行扩增和检测，不需要进行电泳或杂交的操作，只需0.5-1.5小时(针对不同机型)即可完成PCR过程，有利于提高报告出具的速度。?5. 使用方便：镜检、培养等方法检测UU、NG和CT时均需采集三份样本分别进行，由于采集部位的特殊通常给病人带来极大的痛苦，该试剂盒只需一次采样，同时对检验人员而言，只需处理一次标本，为患者和医生都提供了方便。?6. 结果客观可靠：无需人为判断，仪器自动收集和分析数据。适用机型：Roche LightCycler；BIO-RAD icycler；PE7700；PE5700；ABI7300/7500；Line－Gene；Rotor-gene等???? 解脲支原体（M.urealyticum）为脲原体属中唯一的一个种，因生长需要尿素而得名。菌落微小，直径仅有15～25um，须在低倍显微镜下观察，故旧称T株 (tiny strain)。菌落表面有粗糙颗粒，在合适条件下可转成典型的荷包蛋样菌落。生长需要胆固醇和尿素，分解尿素为其代谢特征，产生氨氮，使培养基pH上升。???? 解脲支原体是存在于人类泌尿生殖道的一种重要的病原体，主要通过性生活传播，多见于年轻性旺盛时期，尤多见于不洁性交后。当泌尿生殖道发生炎症，粘膜表面受损时解脲支原体易从破损口侵入，可引起泌尿生殖道感染，临床常见症状为非淋性尿道炎、盆腔炎、前列腺炎、阴道炎、不育不孕症等，也有少数无症状携带者，由于80%孕妇的生殖道内带有解脲支原体，因此可通过胎盘感染胎儿而导致早产、死胎，或在分娩时感染新生儿，引起呼吸道感染；此外，解脲支原体还可引起不孕症，解脲支原体是近年来越来越引起临床重视的病原体之一，并被认为是非淋球菌性尿道炎中仅次于衣原体（占50%）的重要病原体。诊断解脲支原体感染常用的实验室方法有以下几种：?????(一) 分离培养方法 UU在含95% 氮气和5%CO2 环境中生长良好。其生长最适pH为5.5-6.5,最适温度为36℃-37℃。UU具有尿素酶，能分解尿素产氨，使含酚红指示剂的UU液体培养基pH值上升，颜色由黄色变为红色。再将液体培养物转种到UU固体培养基上，能生长成具特征性油煎蛋样集落。(1 )液体培养基：支原体肉汤培养基80mL，马血清或小牛血清10mL，酵母浸液10mL, 10 %尿素溶液0.5mL-1.5mL, 0.4%酚红溶液0.5mL,青霉素(使其在培养基中的浓度为500U/mL-2000U/mL,)用1N HCl调pH值至5.5-6.5, 用小试管分装后置冰箱中备用，每管1.5-2.0mL。(2 ) 固体培养基：在100mL 支原体肉汤培养基中，加入琼脂1.2-1.4g, ,高压灭菌后冷却到 50 ℃左右，逐一加入上述添加剂。摇匀，倒入无菌平皿中，待凝固后，置冰箱中备用。接种标本后，经孵育，若培养基发生由黄变红的颜色变化，透明无混浊(有别于某些细菌及真菌生长)则可初步判断为有支原体生长。大多数UU在24h内可获得阳性结果。如果培养基发生颜色变化，但液体又有混浊，则应排除杂菌污染, 可用0.45μm滤膜过滤后，作再接种观察。进一步诊断需将液体培养物接种到固体培养基上培养, 经Dienes法染色后在低倍显微镜下观察集落形态。阴性结果最好观察５天。UU在固体培养基上集落核心呈粗颗粒状,具极窄的边，有时呈油煎蛋样。如用Dienes法染色，集落为特异的蓝色。一般细菌的菌落不着色，容易鉴别。???? (二) 代谢抑制试验根据特异性抗体能阻止支原体的生长和代谢这一特性，可用病人血清进行代谢抑制试验。在加有抗血清的培养基中，支原体的代谢受到抑制，从而阻止了培养基的颜色改变。代谢抑制试验也可用于检测感染支原体患者血清抗体的滴度。即将血清作10倍连续稀释后，滴入支原体培养液，并以不加血清的支原体试验管和不加支原体液的培养基管作对照。经37℃培养，不加抗血清的培养管支原体应生长良好，培养基变成红色(Uu或Mh)，未加支原体液培养基管颜色不变。未发生颜色变化的最高血清稀释度为代谢抑制试验的抗体滴度。??? (三) 间接血凝试验在一定条件下，抗体和相应抗原相遇，可形成抗原抗体复合物。这种复合物分