肺炎支原体实验室检测方法及临床意义.docVIP

肺炎支原体实验室检测方法及临床意义肺炎支原体(MP)无细胞壁最外层为细胞膜，主要通过呼吸道传播，它不仅引起多种呼吸道疾病，还可导致肺外其他系统的多种并发症。肺炎支原体的致病首先通过其顶端结构粘附在宿主细胞表面，并伸出微管插入胞内吸取营养、损伤细胞膜，继而释放出核酸酶、过氧化氢等代谢产生引起细胞的溶解、上皮细胞的肿胀与坏死。诱发机体产生的抗体也可能参与了上述病理损伤。呼吸道分泌的SI-gA对再感染有一定防御作用，但不够牢固。因MP缺乏细胞壁只对大环内酯类、四环素类等抗生素较为敏感，对常规治疗肺炎的抗生素耐受，而MP感染与病毒及细菌感染引起的呼吸道感染表现难以区别，为避免滥用抗生素，实验室诊断显得尤为重要。现将常用肺炎支原体实验室检测的方法及临床意义分述如下。 病原体的分离与培养 取疑似病人的咽分泌物、痰或胸水接种于2ml无血清液体培养基。并以培养基10倍连续稀释二管、三管同时培养，6周后培养液颜色未改变的判为阴性。不能判断的，取0.1ml接种于牛心浸液的固体平板培养基上，在5％C02环境中，37℃培养1～2周即可长出菌落。选择疑似菌落做溶血试验、生长抑制试验、氯化三苯基四氮唑还原试验、糖发酵分解试验、豚鼠红细胞吸附试验等进行鉴定。MP的分离培养是寻找病原体最可靠的方法，但耗时长(2～3周)，对标本运送及堵养基的要求高，且敏感性一般，尚不能依靠它解决临床快速诊断。故不能用于常规检测，但仍是寻找病原体及流行病学调查的可靠指标。 血清学检查 MP的抗原成分主要存在于细胞膜上，由菌体的脂肪成分所构成，为糖脂类。已知MP感染后，MP可刺激B细胞产生IgM及16；抗体，在鉴定上具有重要意义。主要检测方法有对抗体、抗原及核酸的检测。 补体结合试验：人感染MP后，MP的抗原糖脂成分刺激机体产生特异性抗体，与肺炎支原体细胞膜成分致敏的绵羊红细胞结合形成固着补体使之不发生溶血反应，反之则激活补体，与后加入指示系发生溶血反应，一般补体结合抗体在感染后7～8天开始上升，3～4周达高峰，维持4～6个月，血清效价在1:64以上或恢复期比急性期有4倍或4倍以上增高有诊断意义。但补体结合试验需要一定的仪器和技术，操作较复杂，不适用于临床常规检测。 冷凝集试验：人感染MP后，血清中除出现特异性抗体外，还存在由I抗原刺激机体产生的非特异性IgM冷凝集素。即在4℃条件下可凝集人的O型红细胞或自身洗涤红细胞，在37℃温浴后凝集现象消失。其滴度≥64时肺炎支原体感染有参考意义。庞氏等对临床上146例疑似支原体肺炎患儿进行MP-IgM和冷凝集素检测，结果MP－IgM阳性122例，冷凝集试验阳性92例；36例非支原体肺患儿中，冷凝集试验阳性12例。肺炎支原体感染的病人仅见有34％～65％呈阳性，冷凝集试验为非特异性反应，也可见于肝病、溶血性贫血、传染性单核细胞增多症等。该试验操作简便，但其灵敏度及特异性较低，不是确定诊断的指标。 酶联免疫吸附法(ELISA)：采用间接ELISA技术检测被检者MP－IgM或MP－IgG抗体的方法。IgM抗体出现早，一般在感染后1周出现，3～4周达高峰，以后逐渐降低，12～16周转阴。因此MP－Igi阳性可作为急性期感染的诊断指标。该方法快速、简便、不需任何设备、特异性高但灵敏感度不高，价格也较贵，质量还有待提高。尹氏等报告采用ELISA法对疑诊MP肺炎患儿进行特异性抗体IgA检测，并同时采用明胶颗粒凝集法测定特异性MP－IgM进行比较，结果提示MP－IgA抗体出现较MP－IgM稍晚，但持续时间长、特异性强，并与MP－IgM抗体滴度高低以及呼吸道感染的关系密切。因此。MP-IgA的测定对于提高MP感染诊断的敏感性及特异性可以起到不容忽视的互补作用。IgG上升较晚，持续时间较长。因此IgG效价的上升对MP感染的快速诊断意义不大。 凝集试验：明胶颗粒法是在特异性免疫凝集原理基础上，应用最新开发的明胶粒子和MP纯化抗原。明胶粒子上没有抗原性决定簇，无生物活性，对于血清成分的物理吸附作用也很小，非特异性反应大大减少。庞氏等用该法对临床上146例疑似支原体肺炎患儿进行MP－IgM检测，结果MP－IgM阳性122例阳性率为83.6％。该方法不需任何设备、操作简便、特异性及灵敏度高，用于早期诊断，适合实验室常规检查。 PCR诊断技术 MP含DNA和RNA两种核酸。其基因组为环状双链DNA。Jemen是根据16rRNA基因的可变区P1蛋白基因的序列，设计出两对引物扩增上述两基因的一部分(583bp和153bp)经实验证明此法快速、特异、敏感。取患者咽拭子或痰液、肺泡灌洗液等经洗涤、离心等处理将获得的模板进行变性退火、延伸循环扩增后其产物进行定性测定。可检出≥10cFu/ml的MP。PCR法具有实验