高效液相色谱法测定小儿清咽冲剂中牛蒡苷含量.docVIP

高效液相色谱法测定小儿清咽冲剂中牛蒡苷含量关键词 小儿清咽冲剂 牛蒡苷 高效液相色谱法 资料与方法 仪器与试药：① 仪器：2010AHT高效液相色谱仪，Class-vp工作站， UV－260紫外分光光度计， LC-250超声清洗机（250W 50kHz）。② 试药：牛蒡苷对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号：110819-200404供含量测定用）。乙腈为色谱纯，水为纯化水，小儿清咽冲剂及阴性样品由吉林省吉特药业有限公司提供（样品批号：050101，050102，050103，050104，050105）。 实验方法:①色谱条件:色谱柱：Agilent Extend ODS C18（250mm×4.6 mm, 5μm）；流动相：乙腈-水（23：77）；流速: 1.0ml/min；检测波长: 280nm；进样量：20μl。理论板数按牛蒡苷峰计算应不底于2000。②对照品溶液的制备：取牛蒡苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每 1ml含0.1mg的溶液，即得。③ 供试品溶液的制备：取装量差异项下的本品，研细，取5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50ml，称定重量，超声处理（功率250w，频率50kHz）20分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，滤过，取续滤液，即得。④ 阴性对照溶液的制备:取缺牛蒡子的阴性样品适量，按供试品溶液的制备方法提取阴性对照溶液。 结 果 干扰试验:取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件依法测定，结果显示样品色谱图中与对照品溶液有相同保留时间（tR=26.550分钟）的色谱峰，而阴性对照溶液在此保留时间无此峰，说明小儿清咽冲剂的其他成分对牛蒡苷的测定无干扰。证明本法可行。 线性关系考察:精密吸取对照品储备液（每1ml含0.5mg）各0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ml分别置10ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件进行测定，以峰面积A对对照品浓度C作线性回归。得回归方程为：Y=11008C+1692.4， r=0.9999。结果表明，牛蒡苷在25～250μg/ml范围内呈良好的线性关系。 精密度试验:称取样品（批号：050101）1份，按供试品溶液的制备方法，依上述色谱条件，依法进行测定，连续重复进样6次，测得牛蒡苷峰面积平均值为934361，其RSD为0.5%（n=6）。 重复性试验:平行称取同一样品（批号：050101）6份，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件依法进行测定，并计算含量，结果牛蒡苷平均含量为5.10 mg/袋，RSD=0.7%（n=6）。 稳定性试验 :称取样品（批号：050101）1份，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件依法进行测定，每隔4小时进样1次，测得峰面积平均值为934020，其RSD为1.3%（n=6），表明样品溶液在24小时内稳定。 回收率试验 :采用加样回收试验，精密称取已知含量的样品（批号：050101）细粉6份（各份约2.5g），精密加入牛蒡苷对照品溶液（0.5944mg/ml）4ml，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件依法进行，测定牛蒡苷的含量，并计算回收率，测定结果见表1。 样品测定：取5个批号的样品，按照供试品溶液制备项下方法处理，依上述色谱条件依法进行测定，每批号测定5次，测定结果见表2。 讨 论 检测波长的选择：我们取牛蒡苷对照品的甲醇溶液，经岛津UV-260型可见-紫外分光光度计，在200~300nm范围内扫描，在279nm和228nm处有最大吸收峰。并参考牛蒡子中牛蒡苷 的测定波长，故选择其测定波长为280nm。 流动相的选择：选用乙腈-水（23∶77）作为流动相，牛蒡苷对照品峰形良好，保留时间适宜，理论板数为8669。样品中牛蒡苷与其它组分均能达到基线分离，分离度大于1.5。 提取溶剂的选择：我们曾分别采用了以50%甲醇，甲醇为溶剂。进行样品提取溶剂的比较，实验结果证明，在其他条件完全相同的条件下，两种溶剂无明显差别，但用50%甲醇提取能把样品中的糖溶解，使样品难以过滤，所以，我们选择了以甲醇为溶剂。 提取方法的选择：我们采用超声10分钟，20分钟，30分钟，三个时段的比较，结果超声20分钟好于10分钟，但超声30分钟与超声20分钟无明显差异。故我们采用以甲醇为溶剂超声处理20分钟的提取方法。 参考文献 1 中华人民共和国卫生部药品标准. 中药成方制剂. 第6册，1989：23 2 中国药典.一部，2005：48 1