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课程名称： 现代生物技术概论 授课主题： 第六章 蛋白质工程 授课教师：生命科学系 王国霞 目的要求：初步了解蛋白质结构，以及蛋白质分子设计和蛋白质修饰和表达等的基本原理。了解如何利用蛋白质工程技术和其他相关技术获得更加符合人类需求且比天然蛋白质更优良的蛋白质。 内容重点与难点：蛋白质分子设计和蛋白质修饰和表达等的基本原理 第五章 蛋白质工程 1981年，美国基因公司的Ulmer提出了蛋白质工程这一名称。 1982年，Winter等首次报道了通过基因定位诱变获得改性的酪氨酸tDNA合成酶。 1983年，基因工程诞生10周年之际，著名科学家Ulmer在SCIENCE(VOL.219)发表了论文?Protein Engineering?,该文的发表标志着作为生物工程又一重大技术——蛋白质工程的诞生。 这也标志着人们能够按照自己的意愿创造出适合人类需求的新基因，并能够表达出人类所需要的功能的蛋白质。这是新一代的基因工程，因此，蛋白质工程也被称为第二代基因工程。 蛋白质工程是在重组DNA技术应用于蛋白质结构与功能研究之后发展起来的一门新兴学科。 所谓蛋白质工程，就是通过对蛋白质已知结构和功能的了解，借助计算机辅助设计，利用基因定点诱变等技术，特异性地对蛋白质结构基因进行改造，产生具有新的特性的蛋白质的技术，并由此深入研究蛋白质的结构与功能的关系。 蛋白质工程流程图 蛋白质工程主要内容： 1）根据需要合成具有特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质 2）确定蛋白质化学组成、空间结构与生物功能之间的关系 基本目的： 1）实现从氨基酸序列预测蛋白质的空间结构和生物功能 2）设计合成具有特定生物功能的全新的蛋白质 研究蛋白质的结构和功能，继而人工改造蛋白质的结构，并获得我们所需要的活性蛋白质，正是蛋白质工程的主要任务和目标。 蛋白质工程研究在过去的20多年发展迅速，已取得一批较好成果，并开应用于医学、农业、轻工等各个领域。 蛋白质工程一般是先创造出适合人类需求的新基因，然后表达具有特定结构和功能的蛋白质。 关键技术：基因工程 蛋白质工程称为第二代基因工程 前提：了解蛋白质的结构和功能的关系 第一节 蛋白质结构基础 蛋白质结构的基本构件 蛋白质是一切生命活动的体现者。是构成生命的最重要的基本成分。构成生命的基本物质有蛋白质、核酸、多糖和脂类等。其中蛋白质最为重要，核酸最为根本。生命体的所有功能、活动都必须通过蛋白质实现。 1，蛋白质的化学组成 蛋白质（Protein）: G. J. Mulder 在1838年首次提出。蛋白质是细胞原生质的主要组成成分，其与核酸一起共同构成了生命的物质基础 蛋白质：α氨基酸按一定顺序结合形成一条多肽链，再由一条或一条以上的多肽链按照其特定方式结合合而成的高分子化合物C（ 50-55%）、H（6-7%）、O（20-23%）、N（15-17%）、 S（0.3-2.5%） 另外还有一些微量元素: P、Cu、Fe、Zn、Mn、Co、Se、I 磷、铜、铁、锌、锰、钴、硒、碘 蛋白质是高分子有机化合物，分子量通常在1 0000-100 0000Da，结构非常复杂，能被酸、碱、和蛋白酶水解成大小不等的肽段和氨基酸。 肽：由两个或两个以上氨基酸残基组成的片段。 从蛋白质中水解物中分离出的氨基酸共20种。 表格：20种氨基酸的简写符号： 8种必需氨基酸 按照α-氨基酸α-氨基酸α-氨基酸多肽链。 酰胺键：又称为肽键，一个氨基酸的氨基与另一氨基酸的羧基缩合失去一分子水形成的。 多肽链：一般由3个或3个以上的氨基酸组成的肽称为多肽。 蛋白质的肽链结构称为蛋白质的化学结构，它包括氨基酸组成、肽键数目、末端组成、氨基酸排列顺序和二硫键的位置等内容。 一般情况下，一个蛋白质分子中的肽键数目应等于末端氨基残基的数目。由此可以确定肽键构成。 蛋白质的一级结构：就是由许多氨基酸残基按照一定的顺序排列，通过肽键连接而成的多肽链结构。 胰岛素分子一级结构图 这种现象说明，每一种蛋白质的肽链的氨基酸残基都有着一定的排列顺每一种蛋白质的功能与它的肽链氨基酸序列和肽链构成的高级结构有着不可分割的联系。蛋白质的一级结构是最基本的结构，它包含着决定蛋白质的高级结构的关键性因素。 二、蛋白质的高级结构 分子结构：一级结构、二级结构、三级结构和四级结构。 分子构象：蛋白质分子中所有原子在三维空间中的分布情况和分布规律。 分子构象又称为：空间结构、高级结构、立体结构、三维结构。 二级结构：指多肽链主链骨架中的若干肽段，各自沿着某个轴盘旋或折叠，并以氢键维系，从而形成有规则的构象。 α螺旋、β折叠和β转角 三级结构：在三维空间中沿着多方向进行卷曲、折叠、盘绕而成的近似球形的结构。 维持蛋白质构象作用力：有四种